整合素β3胞漿段尾部NITY基序?qū)Ζ罥Ibβ3介導(dǎo)的細(xì)胞功能的影響及機(jī)制研究.pdf

1、整合素αIIbβ3(GPⅡb-Ⅲa)是血小板膜上的主要受體，通過雙向信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)血小板的黏附、伸展和聚集。整合素αIIbβ3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，β3胞漿段的氨基酸起關(guān)鍵性作用，許多信號(hào)分子（如talin，kindlin等）與β3胞漿段特定的氨基酸序列相互作用，調(diào)控整合素αIIbβ3的雙向信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。整合素β3胞漿段尾部NITY基序調(diào)控調(diào)控整合素αIIbβ3相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及機(jī)制研究至今尚未完全闡明。
　　本研究體外細(xì)胞模型：利用中國倉鼠卵巢

2、（CHO）細(xì)胞建立共表達(dá)人類野生型整合素αIIb和野生型β3或突變型β3?NITY（β3胞漿段缺失NITY基序）穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，通過細(xì)胞在固相化纖維蛋白原上的黏附伸展實(shí)驗(yàn)檢測各穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的的黏附及伸展功能，通過免疫共沉淀方法檢測蛋白相互作用。
　　體內(nèi)小鼠模型：
　　利用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的造血干細(xì)胞移植建立空載（vector）、β3野生型和β3?NITY轉(zhuǎn)基因小鼠模型，在血小板上研究整合素β3胞漿段尾部NITY基序?qū)ρ“骞δ艿恼{(diào)

3、控作用。通過轉(zhuǎn)基因血小板與游離的纖維蛋白原的結(jié)合檢測整合素αIIbβ3的內(nèi)向外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能；通過轉(zhuǎn)基因血小板在固相化纖維蛋白原的伸展檢測整合素αIIbβ3的外向內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。
　　體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，成功建立了CHO-αIIbβ3和CHO-αIIbβ3?NITY細(xì)胞株。穩(wěn)定表達(dá)野生型整合素αIIbβ3的CHO細(xì)胞獲得在固相化纖維蛋白原上的黏附和伸展能力，相較于CHO-αIIbβ3細(xì)胞株，CHO-αIIbβ3?NITY細(xì)胞株黏附能力

4、減弱，但是黏附后的伸展能力無明顯改變。免疫共沉淀結(jié)果顯示，kindlin-2能夠結(jié)合野生型整合素β3，但與突變型整合素β3結(jié)合的量顯著減少。而src與野生型整合素β3和突變型整合素β3的結(jié)合無明顯差異。小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，成功構(gòu)建了vector、β3野生型和β3胞漿段缺失NITY基序的轉(zhuǎn)基因小鼠模型。相較于β3野生型的血小板，β3?NITY的血小板與游離纖維蛋白原的結(jié)合能力減弱，但是在固相化纖維蛋白原上的伸展能力不受影響。
　　結(jié)論