As-,2-O-,3-下調(diào)K562細胞β1整合素表達逆轉(zhuǎn)細胞粘附介導的耐藥.pdf

1、1．研究背景和目的：骨髓微環(huán)境可以保護白血病細胞，促使白血病細胞耐藥，導致化療后微小病灶殘留（minimal residual disease MRD）成為復發(fā)的根源。本實驗在體外分離培養(yǎng)初治慢性粒細胞白血病患者的骨髓原代基質(zhì)細胞（bone marrow stromal cellBMSC），模擬慢性粒細胞白血病患者骨髓微環(huán)境，觀察慢性粒細胞白血病骨髓基質(zhì)細胞對K562細胞的保護作用，以及K562細胞經(jīng)過As2O3單藥及與常規(guī)化療藥物聯(lián)合

2、處理后，細胞間粘附作用及對藥物敏感性的變化，探討As2O3逆轉(zhuǎn)細胞粘附介導的耐藥（CAM—DR）的作用及其機制。 2．實驗方法: 2．1細胞培養(yǎng)及實驗分組 分離慢性粒細胞白血病患者骨髓基質(zhì)細胞進行原代培養(yǎng)后，模擬白血病骨髓微環(huán)境與K562細胞共培養(yǎng)，同時設(shè)K562細胞懸浮培養(yǎng)為對照組。 2．2 MTT法測定藥物對K562細胞的生長抑制作用 通過MTT法檢測K562細胞對化療藥物的敏感性及As2O3

3、與化療藥物聯(lián)合的效應(yīng)。通過對存活細胞百分數(shù)和藥物濃度的線性回歸分析方法計算IC50值。用金正均q值法分析藥物之間相互作用。 2．3流式細胞學檢測細胞凋亡 用AnnexinV/PI雙染法檢測共培養(yǎng)組和懸浮組K562細胞凋亡率的差異，觀察As2O3對兩組細胞凋亡率的影響。 2．4骨髓基質(zhì)細胞對K562細胞粘附率測定 將K562細胞按濃度或用藥時間兩種方式處理后與BMSC粘附，通過粘附?jīng)_洗實驗觀察經(jīng)As2O3處

4、理后K562細胞粘附率變化。 2．5蛋白免疫印記檢測β1整合素蛋白水平的表達 將按濃度或用藥時間兩種方式處理后處理過的K562細胞提取全細胞蛋白，用蛋白酶免疫印跡法檢測β1整合素蛋白表達的情況。 2．6統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)采用x—±s表示，利用SAS8．0軟件進行統(tǒng)計分析。采用t檢驗，P<0．05即認為有統(tǒng)計學意義。 3．結(jié)果： 化療藥物對共培養(yǎng)后的K562細胞抑制率與單獨懸浮培養(yǎng)組比較顯著降

5、低：0．1μM Ara—C抑制率（47．1±8．5％ VS35．2±2．1％），DNR IC50（0．045±0．006 VS0．082±0．009μM，P<0．01）；然而As2O3對共培養(yǎng)后的K562細胞與單獨懸浮培養(yǎng)組比較IC50無明顯差異（1．602±0．392 VS1．681±0．142μM，P>0．05），且As2O3與化療藥物聯(lián)合作用時兩組間抑制率也無明顯差異。通過金正均Q值法分析得出：在懸浮組藥物聯(lián)合為相加作用，而共培養(yǎng)