低溫儲存對皮膚β-,1-整合素及相關(guān)蛋白的影響與干預(yù)研究.pdf

1、研究背景及目的：近年來隨著低溫生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，研究者已將目光逐漸從低溫?fù)p傷對單細(xì)胞的影響轉(zhuǎn)移到組織完整性的破壞上。細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)作為細(xì)胞生存的微環(huán)境，其任何改變都有可能通過細(xì)胞膜作用于整個細(xì)胞，進(jìn)而影響其生物學(xué)性狀及功能。對皮膚而言，作為活力較高的基底細(xì)胞層部分，其破壞程度將會影響整個皮片組織的活力。研究發(fā)現(xiàn)在皮膚基底細(xì)胞膜表面存在著一種重要的膜蛋白受體即β<,1>整合素(β<,1>integrin)，它作為多種細(xì)胞外基質(zhì)的受體，

2、通過細(xì)胞內(nèi)踝蛋白在介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞骨架之間起著橋梁作用，同時對于維持細(xì)胞膜完整性及其活性方面可能發(fā)揮著重要意義。本課題旨在研究皮膚組織低溫儲存后細(xì)胞外基質(zhì)成分層粘連蛋白(LN)、細(xì)胞膜表面分子β<,1>integrin、細(xì)胞內(nèi)踝蛋白(talin)的改變，同時繼續(xù)探討海藻糖(trehaIose)作為低溫保護(hù)劑的研究，通過其對皮膚低溫?fù)p傷的干預(yù)，觀察β<,1>integrin改變，進(jìn)一步揭示皮膚低溫?fù)p傷機(jī)制并為完善海藻糖作為低溫保護(hù)劑有

3、效成分提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：在第一部分中采用病人燒傷整形術(shù)后(4小時內(nèi))所余正常皮片，隨機(jī)分為4℃組、-20℃組、-80℃組、-196℃組，設(shè)新鮮組為對照組。分別在不同的時間點(diǎn)進(jìn)行實(shí)馬僉觀察，首先通過H．E．染色和免疫組織化學(xué)染色兩種病理方法在光鏡下觀察基底細(xì)胞形態(tài)和蛋白的變化，采用Image-Pro5.0圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析，研究指標(biāo)包括βlintegrin、laminin、talin；其次，采用透射電鏡觀察基底膜的變化，

4、并應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測β<,1>integrin基因水平表達(dá)規(guī)律。近年來海藻糖抗凍性能在低溫領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，為了明確其對皮膚低溫儲存是否發(fā)揮較傳統(tǒng)保護(hù)劑更為優(yōu)勢的作用，從而達(dá)到完善皮膚抗凍劑配方的目的，在本實(shí)驗(yàn)第二部分中，繼以往海藻糖對皮膚組織細(xì)胞骨架成分保護(hù)作用的基礎(chǔ)之上，進(jìn)一步采用免疫組織化學(xué)方法、RT-PCR方法觀察了海藻糖對細(xì)胞膜表面分子β<,1>integrin的作用，并分別應(yīng)用透射電鏡和琥珀酸脫氫

5、酶定量檢測法觀察兩種不同低溫保護(hù)劑組合對皮膚基底膜及活力的影響。 結(jié)論：β<,1>integrin、laminin、talin在皮膚低溫?fù)p傷中發(fā)生了較為明顯的變化，結(jié)合這三種蛋白與細(xì)胞骨架的密切關(guān)系以及既往對細(xì)胞骨架在低溫?fù)p傷中的研究基礎(chǔ)，可推知β<,1>integrin、laminin、talin可能在參與并介導(dǎo)細(xì)胞骨架對皮膚組織的低溫?fù)p傷中發(fā)揮著重要的作用。在傳統(tǒng)低溫保護(hù)劑中添加海藻糖后，皮膚活力得以提高的原因體現(xiàn)在多方面，