整合素αvβ6調(diào)控結(jié)腸癌細胞轉(zhuǎn)錄因子EtS-1表達的分子機制研究.pdf

1、目的:
　　 探討整合素αvβ6對結(jié)腸癌細胞核轉(zhuǎn)錄因子Ets-1表達的影響;明確整合素αvβ6-ERK2直接連接在調(diào)控Ets-1表達過程中發(fā)揮的作用。
　　 方法:
　　 1.流式細胞儀檢測各組結(jié)腸癌SW480細胞表面αvβ6的表達水平;
　　 2.結(jié)腸癌SW480細胞分為3組:(1)SW480組:野生型結(jié)腸癌SW480細胞，無β6表達;(2)SW480β6組:轉(zhuǎn)染β6的結(jié)腸癌SW480細胞，可穩(wěn)定表達β

2、6;(3)SW480Mock組:轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒，作為陰性對照，采用westernblotting法分別檢測各實驗組Ets-1、ERK的表達水平以及ERK磷酸化水平;
　　 3.結(jié)腸癌SW480細胞分為3組:(1)SW480β6組:轉(zhuǎn)染β6的結(jié)腸癌SW480細胞，可穩(wěn)定表達β6;(2)SW480Mock組:轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒，作為陰性對照;(3)SW480β6Del.mutant組:敲除β6胞內(nèi)段ERK2結(jié)合位點，采用westernblott

3、ing法分別檢測各實驗組ERK磷酸化水平;
　　 4.結(jié)腸癌SW480細胞分為5組:(1)SW480β6組;(2)SW480Mock組;(3)SW480β6Del.mutant組;(4)SW480β6細胞+DMSO組:陰性對照;(5)SW480β6細胞+PD98059組:用含20μmol/LPD98059的培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)腸癌細胞SW480β624h;采用westernblotting法分別檢測各實驗組Ets-1表達水平;
　

4、　 5.半定量光密度分析所得數(shù)據(jù)均采用單因素方差分析和LSD檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果及意義:
　　 1.SW480β6和SW480β6Del.mutant細胞均有αvβ6表達，轉(zhuǎn)染后的結(jié)腸癌SW480細胞可以穩(wěn)定表達整合素αvβ6;
　　 2.SW480β6細胞Ets-1的表達量較SW480細胞明顯增多(P＜0.05)，同時ERK的磷酸化水平(p-ERK)也明顯升高，而總ERK(t-E

5、RK)表達水平二者無明顯差異，整合素αvβ6能夠促進ERK的磷酸化，也能夠提高核轉(zhuǎn)錄因子Ets-1的表達水平;
　　 3.SW480β6Del.mutant細胞ERK2的磷酸化水平較SW480β6細胞明顯降低;SW480β6Del.mutant細胞和PD98059處理的SW480β6細胞Ets-1的表達水平明顯低于對照組(P＜0.05)，由此可以推測整合素αvβ6是通過αvβ6-ERK2直接連接促進核轉(zhuǎn)錄因子Ets-1的表達。<

6、br>　　 綜上所述，本實驗深入研究分析了整合素αvβ6與結(jié)腸癌細胞中ERK磷酸化及Ets-1表達的密切關系，證實αvβ6通過αvβ6-ERK2直接連接提高ERK2的磷酸化水平，從而促進結(jié)腸癌SW480細胞核轉(zhuǎn)錄因子Ets-1表達。進一步從分子水平闡釋了整合素αvβ6促進結(jié)腸癌惡性進展的作用機制，為深入研究αvβ6在結(jié)腸癌增殖、侵襲轉(zhuǎn)移及化療耐藥等惡性生物學行為中發(fā)揮的作用提供了理論基礎，也為以αvβ6及其相關蛋白為靶點對結(jié)腸癌進行靶