金雀異黃素抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察金雀異黃素(Genistein,GEN)對(duì)體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞系(SW-480)細(xì)胞增殖抑制作用，探討GEN抗腫瘤作用機(jī)制。方法：體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細(xì)胞系(SW-480)細(xì)胞，MTT比色法測(cè)定GEN對(duì)SW-480細(xì)胞增殖抑制作用。細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定GEN對(duì)SW-480細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：PI染色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析GEN作用后的細(xì)胞周期分布和凋亡率；免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測(cè)GEN對(duì)SW-480細(xì)胞NF-κβ、Bcl-2、Bax、COX

2、2蛋白表達(dá)的影響；Westernblot檢測(cè)GEN對(duì)ERKl/2磷酸化水平的影響。結(jié)果：　　1.MTT比色法測(cè)定結(jié)果顯示，GEN(6.25、12.5、25、50、100gmol/L)對(duì)體外培養(yǎng)SW480細(xì)胞具有抑制增殖作用，呈劑量的依賴性(p＜0.05)?！　?.細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定顯示，GEN50gmol/L對(duì)SW480細(xì)胞24h其抑制率為28％，48h其抑制率為50％，第6天其抑制率為86％。對(duì)SW480細(xì)胞增殖抑制作用呈時(shí)間依賴性。

3、　　3.流式細(xì)胞術(shù)分析顯示GEN作用于SW480細(xì)胞，出現(xiàn)G2/M期阻滯?！　?.免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果顯示，GEN50、100μmol/L對(duì)SW480細(xì)胞，對(duì)照組bcl-2、N-F-κB、COX表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，而處理組呈陰性或弱陽(yáng)性，陽(yáng)性率明顯降低，處理組平均灰度值較對(duì)照組明顯高(p＜0.05)。對(duì)照組Bax呈陰性或弱陽(yáng)性，而處理組呈強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性率明顯增加，處理組平均灰度值較對(duì)照組明顯低(p＜0.05)。　　5.WesternBl

4、ot結(jié)果顯示：6.25、12.5、25、50、100amol/L的GEN處理SW480細(xì)胞，呈濃度依賴性抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞ERKl/2蛋白磷酸化。(P＜0.05)。結(jié)論：　　1.金雀異黃素對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系(SW-480)細(xì)胞增殖具有抑制作用?！　?.金雀異黃素抑制SW-480細(xì)胞生長(zhǎng)作用與抑制ERKl/2蛋白磷酸化誘導(dǎo)G2/M期阻滯和細(xì)胞凋亡相關(guān)?！　?.金雀異黃素通過(guò)下調(diào)SW-480細(xì)胞NF-κB、Bcl-2和COX2蛋白的表達(dá)，