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文檔簡介
1、目的:探討褪黑素(melatonin,Mel)對(duì)結(jié)腸癌RKO細(xì)胞增殖、凋亡和遷移的影響及其分子機(jī)制。
方法:MTT法檢測(cè)Mel對(duì)RKO細(xì)胞增殖的影響,Westernblot檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulum stress,ERs)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,檢測(cè)Mel受體MT1、MT2的表達(dá)水平。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Mel對(duì)RKO細(xì)胞遷移的影響,檢測(cè)肌球蛋白輕鏈激酶(mitogenactivatedproteinki
2、nases,MLCK)和骨橋蛋白(osteopontin,OPN)的表達(dá)水平。檢測(cè)絲裂原活化的蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinases,MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白,并且加入抑制劑和激活劑研究Mel對(duì)其的作用。
結(jié)果:RKO細(xì)胞經(jīng)過Mel處理可以抑制其增殖,同時(shí)重鏈結(jié)合蛋白(heavychainbindingprotein,BIP)的表達(dá)水平下降、C/EBP同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸
3、蛋白酶3(cysteinylaspartatespecificproteinase3,caspase3)的表達(dá)水平上升,表明Mel可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑促進(jìn)RKO細(xì)胞凋亡。Mel可以誘導(dǎo)RKO細(xì)胞中MT1的表達(dá)上升,對(duì)MT2無誘導(dǎo)作用。Mel可以抑制RKO細(xì)胞遷移,并且可以抑制MLCK和OPN的表達(dá),RKO細(xì)胞的遷移能力與MLCK和OPN的表達(dá)下降有關(guān)。通過對(duì)MAPK通路蛋白的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),Mel上調(diào)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(extra
4、cellularsignal-regulatedproteinkinase1/2,ERK1/2)的磷酸化水平,下調(diào)p38(p38mitogenactivatedproteinkinases,p38)和C-JunN末端激酶(C-JunN-terminalkinase,JNK)的磷酸化水平,發(fā)揮抗腫瘤作用。
結(jié)論:Mel可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)RKO細(xì)胞凋亡,抑制其增殖,并且通過下調(diào)細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白MLCK和OPN的表達(dá)水平,抑
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