PAR2和TLR4對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW620增殖與遷移的促進(jìn)作用及其機(jī)制初探.pdf

1、目的：觀察蛋白酶激活受體2(protease-activated receptors2，PAR2)和Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)在結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的表達(dá)；分析PAR2和TLR4對(duì)SW620細(xì)胞增殖與遷移的促進(jìn)作用并探討其可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 (1)采用RT-PCR和western blotting檢測(cè)SW620細(xì)胞在基礎(chǔ)狀態(tài)下PAR2和TLR4 mRNA和蛋白表達(dá)；以

2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和流式細(xì)胞儀檢測(cè)PAR2激動(dòng)劑(PAR2-AP)激活PAR2后細(xì)胞TLR4 mRNA和蛋白表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)脂多糖(LPS)激活TLR4后細(xì)胞PAR2 mRNA和蛋白水平，從而分析PAR2和TLR4之間是否能夠相互誘導(dǎo)表達(dá)。
　　 (2)采用PAR2-AP、LPS、PAR2-AP/LPS以及抗PAR2抗體、紫衫醇(paclitaxel)等刺激物或抑制物處理SW620細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期時(shí)相分布，transw

3、ell法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，分析PAR2和TLR4對(duì)SW620細(xì)胞增殖與遷移的促進(jìn)作用，并觀察兩受體間有無協(xié)同作用。
　　 (3)SW620細(xì)胞經(jīng)PAR2-AP、LPS、PAR2-AP/LPS等作用后，westem blotting檢測(cè)細(xì)胞p38MAPK、ERK1/2磷酸化水平，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞IL-8、TF、caspase-7 mRNA表達(dá)；進(jìn)一步以ERK1/2抑制劑(U0126)處理SW620細(xì)胞，然后觀察PAR2-

4、AP、LPS、PAR2-AP/LPS對(duì)細(xì)胞IL-8、TF、caspase-7表達(dá)的影響，初步探討PAR2和TLR4促進(jìn)SW620細(xì)胞增殖與遷移的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 (1)SW620細(xì)胞在基礎(chǔ)狀態(tài)下表達(dá)PAR2和TLR4 mRNA和蛋白；PAR2被活化后細(xì)胞TLR4 mRNA表達(dá)明顯上調(diào)，但其蛋白表達(dá)僅輕微增加；TLR4被活化后細(xì)胞PAR2 mRNA表達(dá)增加明顯，而其蛋白表達(dá)升高不顯著。
　　 (2)P

5、AR2和TLR4的分別活化均能使SW620細(xì)胞S期比率升高，G1期細(xì)胞所占比例相應(yīng)下降，細(xì)胞遷移數(shù)增加，且PAR2和TLR4同時(shí)活化的促進(jìn)作用更明顯，抗PAR2抗體和paclitaxel均可抑制此作用。
　　 (3)PAR2和TLR4活化均能使SW620細(xì)胞ERK1/2磷酸化增強(qiáng)，而p38MAPK磷酸化水平變化不明顯；另外，PAR2和TLR4活化還上調(diào)細(xì)胞IL-8、TF mRNA表達(dá)，下調(diào)caspase-7 mRNA表達(dá)；且ER

6、K1/2抑制劑(U0126)可阻斷PAR2和TLR4對(duì)SW620細(xì)胞IL-8、TF、caspase-7 mRNA表達(dá)的調(diào)控。
　　 結(jié)論：
　　 (1)SW620細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)表達(dá)PAR2和TLR4 mRNA和蛋白，且兩受體能相互誘導(dǎo)表達(dá)，但mRNA和蛋白變化不一致。
　　 (2)PAR2和TLR4激活均能促進(jìn)SW620細(xì)胞增殖與遷移，且兩受體間具有協(xié)同作用。
　　 (3)PAR2和TLR4均能增強(qiáng)SW62