PI3K抑制劑對(duì)HGF促人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的增殖和遷移行為的影響.pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重危害著人類身體健康。因此，尋找治療腫瘤的有效方法是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。在我國(guó)，隨著人們生活水平的不斷提高，結(jié)直腸癌的發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)。目前臨床上主要采用以手術(shù)為主、化療和放療為輔的綜合治療手段，但效果并不理想，因此，仍需探索更加有效的新療法。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、增生、分化和代謝等一系列生理活動(dòng)。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的增殖、抗凋亡、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為與細(xì)胞信號(hào)通路異常有關(guān)。因此，能否在這一方面尋求一條新的治療腫瘤

2、的出路是很有前景和挑戰(zhàn)性的課題。
　　 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Hepatocyte Grouth Factor，HGF)是一種由多種細(xì)胞分泌的多肽生長(zhǎng)因子，具有強(qiáng)促分裂、組織成形、誘導(dǎo)上皮細(xì)胞遷移、侵襲以及誘導(dǎo)血管生成等作用。有研究表明，在結(jié)直癌患者中與正常組相比較，血清中HGF含量顯著升高，且分期越晚，HGF值越高，而其中合并肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直癌患者較之無轉(zhuǎn)移的結(jié)直癌患者，HGF值更高。因此認(rèn)為HGF參與了結(jié)直腸癌的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。HGF通過

3、與其受體c-Met結(jié)合進(jìn)而導(dǎo)致包括磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3-kinases，PI3K)-蛋白激酶B(protein kinaseB，AKT/PKB)在內(nèi)的多個(gè)信號(hào)通路引起一系列生物效應(yīng)，從而發(fā)揮其生理作用的。被激活的PI3K可使AKT磷酸化，來調(diào)節(jié)管理細(xì)胞代謝、生存、凋亡、分化和增殖等一系列生理活動(dòng)。有研究表明，AKT/PKB參與了多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移。腫瘤組織中AKT/PKB活性水平高可以是其上游

4、調(diào)節(jié)異常造成的，所以通過抑制HGF/c-Met介導(dǎo)的信號(hào)通路來抑制腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移目前正逐漸成為腫瘤治療研究的新方向。我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，HGF具有促進(jìn)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620增殖、遷移等作用，但其作用機(jī)制尚未闡明。
　　 目前抑制HGF/c-Met介導(dǎo)的生物學(xué)活性方法有多種，包括：HGF的拮抗劑、RNA干擾技術(shù)等方法，關(guān)于抑制HGF下游信號(hào)傳導(dǎo)通路PI3K/AKT后是否即可抑制HGF促進(jìn)結(jié)直腸癌的增殖、侵襲作用的研究報(bào)道不

5、多。
　　 目的：探討PI3K/AKT信號(hào)通路在HGF促進(jìn)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞增殖、侵襲中所起到的作用，以期為探求一條新的結(jié)直腸癌治療途徑提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.用MMT法分析檢測(cè)PI3K/AKT信號(hào)通路在HGF促進(jìn)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620增殖中的作用。
　　 2.用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PI3K/AKT信號(hào)通路在HGF調(diào)節(jié)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620細(xì)胞周期、抗凋亡中的作用。
　　 3.用劃痕實(shí)

6、驗(yàn)觀察PI3K/AKT信號(hào)通路在HGF促進(jìn)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620細(xì)胞移行中的作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.LY294002對(duì)SW620增殖的影響應(yīng)用MTT法結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組加入LY294002作用48h，濃度＞20μmol/L三實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OD值比較差異有顯著性(P＜0.05)，且這三個(gè)濃度組間OD值比較差異有顯著性(P＜0.05)。終濃度為10μmol/L、5μmol/LLY294002組、DMSO組與對(duì)照組之間O

7、D值比較差異無顯著性(P＞0.05)。
　　 2.LY294002對(duì)SW620凋亡、細(xì)胞分裂周期的影響流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，隨LY294002濃度下降SW620凋亡率呈下降趨勢(shì)，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異均有有顯著性差異(P＜0.05)。SW620增值指數(shù)(PI)％隨LY294002濃度下降呈升高趨勢(shì)，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);10μmol/L與對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.LY2940

8、02對(duì)SW620移行的影響劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，培養(yǎng)細(xì)胞3天，測(cè)量劃痕空隙寬度，在同一天內(nèi)實(shí)驗(yàn)組移行距離較對(duì)照組短，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.5)，DMSO組與對(duì)照組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.LY294002抑制PI3K/AKT信號(hào)途徑后能夠抑制HGF對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620增殖的促進(jìn)作用，且抑制作用與濃度相關(guān)。
　　 2.LY294002抑制PI3K/AKT信號(hào)途徑后