層粘連蛋白-整合素α7β1信號(hào)通路對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞分泌功能的影響及機(jī)制.pdf

1、研究背景:
　　在哮喘病理發(fā)展過(guò)程中,氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)不僅數(shù)量的增加,還有功能的改變;此外還有有細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)量的改變和組成的改變。ASMCs能分泌TGF-β、eotaxin等多種免疫調(diào)節(jié)因子,具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能。在哮喘病人氣道中,纖維粘連蛋白、Ⅰ型膠原和層粘蛋白等明顯增加。纖維粘連蛋白、Ⅰ型膠原促進(jìn)ASMCs的增殖及分泌eotaxin等免疫因子,層粘蛋白則抑制ASMCs的增殖。但層粘連蛋白對(duì)ASMCs分泌功

2、能的影響尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。層粘連蛋白在黑色素瘤細(xì)胞中能通過(guò)增加MKP-1的表達(dá)抑制腫瘤轉(zhuǎn)移,由此,層粘連蛋白是否可以通過(guò)增加MKP-1的表達(dá)來(lái)影響氣道平滑肌細(xì)胞分泌功能。整合素是ECM與細(xì)胞骨架及信號(hào)通路連接的橋梁。整合素α7β1表達(dá)于氣道平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞,整合素α7特異性的與層粘連蛋白結(jié)合,因此,層粘連蛋白是否通過(guò)整合素α7β1影響氣道平滑肌細(xì)胞分泌功能。
　　目的:
　　探討層粘連蛋白-整合素α7β1信號(hào)通路是否能影響ASM

3、Cs表達(dá)及分泌TGF-β1、eotaxin-1等因子及其機(jī)制。并探討層粘連蛋白對(duì)哮喘小鼠的作用。
　　方法:
　　1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)出人氣道平滑肌細(xì)胞(HASMCs),將2-5代的HASMCs用于實(shí)驗(yàn)。將HASMCs接種于層粘連蛋白(10ug/ml)包被的培養(yǎng)板及空白培養(yǎng)板中,用整合素α7單抗、β1單抗阻斷層粘連蛋白與HASMCs表面的整合素α7β1結(jié)合;用IL-13(20ng/ml)刺激HASMCs模擬哮喘環(huán)

4、境。分為6組:空白組、IL-13組、IL-13+LN組、LN組、IL-13+LN+antiα7組、IL-13+LN+antiβ1組。通過(guò)realtimePCR法檢測(cè)HASMCs中TGF-β1、eotaxin-1、MKP-1的mRNA表達(dá),ELISA法檢測(cè)HASMCs培養(yǎng)上清中TGF-β1、eotaxin-1蛋白,通過(guò)WesternBlot檢測(cè)HASMCs中MKP-1蛋白表達(dá)。
　　2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):建立BALB/c小鼠哮喘模型,分3組

5、:正常對(duì)照組(用生理鹽水代替OVA),哮喘組,層粘連蛋白組(每次激發(fā)前2h用層粘連蛋白200ug預(yù)處理)。用HE染色及PAS染色觀察小鼠氣道炎癥及杯狀細(xì)胞增生情況,用ELISA法檢測(cè)小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-4的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1)層粘連蛋白-整合素α7β1抑制IL-13誘導(dǎo)的HASMCsTGF-β1、eotaxin-1mRNA表達(dá)及蛋白分泌,增加MKP-1mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)。IL-13組與空白組比較:T

6、GF-β1、eotaxin-1mRNA表達(dá)及蛋白分泌增加(p<0.05),MKP-1mRNA及蛋白表達(dá)減少(p<0.05);IL-13+LN組與IL-13組比較:TGF-β1、eotaxin-1mRNA表達(dá)及蛋白分泌減少(p<0.05),MKP-1mRNA及蛋白表達(dá)增加(p<0.05);IL-13+LN+antiα7組、IL-13+LN+antiβ1組與IL-13+LN組比較:TGF-β1、eotaxin-1mRNA表達(dá)及蛋白分泌增加(

7、p<0.05),MKP-1mRNA及蛋白表達(dá)減少(p<0.05)。
　　2)層粘連蛋白減輕哮喘氣道炎癥及減少杯狀細(xì)胞增生,減少BALF中的IL-4,對(duì)哮喘具有保護(hù)作用。哮喘組與正常對(duì)照組比較,氣道炎癥明顯加重,杯狀細(xì)胞明顯增生,BALF中IL-4增加(p<0.05);層粘連蛋白組與哮喘組比較,氣道炎癥明顯減輕,杯狀細(xì)胞明顯減少,BALF中IL-4減少(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明層粘連蛋白能抑制IL-