整合素β1在CD151促HUVEC遷移增殖中的機制研究.pdf

1、目的：構建PAAV-CD151-AAA194-196突變體，三質(zhì)粒鈣磷共轉(zhuǎn)染法包裝病毒，并轉(zhuǎn)染臍靜脈內(nèi)皮細胞，研究整合素β1在CD151基因促進臍靜脈內(nèi)皮細胞遷移增殖中的機制。
　　 方法：1.質(zhì)粒的提取和鑒定；
　　 2.三質(zhì)粒鈣磷共轉(zhuǎn)染法包裝病毒，并通過斑點雜交法檢測重組腺相關病毒滴度；
　　 3.培養(yǎng)HUVEC，并隨機分為四組：Control組，GFP組，CD151組和QRD組。用rAAV-GFP、rAAV

2、-CD151和rAAV-CD151-AAA194-196轉(zhuǎn)染HUVEC，并進行以下實驗：
　　 3.1 通過SRB法檢測CD151基因?qū)δ氺o脈內(nèi)皮細胞增殖的影響；
　　 3.2 通過細胞劃痕試驗檢測CD151基因?qū)δ氺o脈內(nèi)皮細胞遷移能力的影響；
　　 3.3 通過Western blot 方法檢測CD151、Akt、P-Akt、PI3K及β1各蛋白在HUVEC中的表達。
　　 結(jié)果：與對照組及GFP組相比

3、CD151組能明顯促進細胞的增殖（P<0.05），而QRD組則顯著抑制細胞的增殖；與對照組及GFP組相比CD151組能明顯促進細胞的遷移（P<0.05），而QRD組則顯著抑制細胞的遷移；CD151組和CD151-AAA194-196突變體組的CD151蛋白表達水平較對照組和GFP組明顯增加，而CD151組和CD151-AAA194-196突變體組的CD151蛋白表達水平無明顯差異；CD151組β1、PI3K、P-Akt蛋白表達量與對照組

4、、GFP組和QRD組相比明顯增加；而對照組、GFP組、CD151組和QRD組的總Akt蛋白表達無明顯差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：轉(zhuǎn)染CD151基因及其突變后都能有效的感染HUVEC并明顯促進CD151蛋白表達，但因為QRD組改變了CD151與整合素β1的正常結(jié)合，進而改變了整合素與下游蛋白的相互作用，明顯降低了其生物學效應。其分子機制為CD151與整合素β1形成復合物促進PIK/Akt信號通路的激活，促進HUVEC的遷移