MiR-29c在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后抑制柔腦膜纖維化的實驗研究.pdf

1、背景:
　　蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)是第三位急性腦血管事件，其發(fā)生率僅次于腦梗死和腦出血。慢性交通性腦積水是蛛網(wǎng)膜下腔出血后常見并發(fā)癥之一，文獻報道發(fā)生率在8％～67％，可嚴重影響患者預(yù)后。目前認為，柔腦膜纖維化是蛛網(wǎng)膜下腔出血后慢性交通性腦積水發(fā)生的主要原因。
　　microRNA是一類長度約18～25個核苷酸的內(nèi)源性非編碼調(diào)控單鏈小RNA分子，主要功能是通過結(jié)合靶基因mRN

2、A，抑制靶基因轉(zhuǎn)錄或促使靶基因降解，從而抑制基因表達。miR-29家族成員包括miR-29a、miR-29b-1、miR-29b-2、miR-29c。除參與腫瘤生長、細胞衰老及分化過程外，抑制組織器官纖維化是目前文獻報道m(xù)iR-29家族主要功能。在肝臟、腎臟、心臟、肺等組織器官纖維化過程中，miR-29家族表達均下調(diào)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，實驗性蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠柔腦膜中miR-29c表達亦存在下調(diào)，miR-29a、miR-29 b表達

3、無統(tǒng)計學(xué)意義。本實驗擬利用慢病毒感染的方式使miR-29c過表達，觀察miR-29c對柔腦膜纖維化的影響。
　　目的:
　　通過觀察高表達miR-29c后實驗性蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠柔腦膜內(nèi)膠原蛋白及腦脊液中PICP的表達情況，探討miR-29c在蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后柔腦膜纖維化過程中的作用。
　　方法:
　　選用(300±20)g健康雄性SD大鼠26只按隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)組(6只）、空白慢病毒組（8只）、

4、LV-rno-miRNA-29c組（12只）。側(cè)腦室內(nèi)分別注入5μL生理鹽水、5μL空白慢病毒、5μL LV-rno-miRNA-29c。注射1周后，通過枕大池二次注血法建立蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。造模21d后處死大鼠，采集大鼠柔腦膜及腦脊液標(biāo)本，采用Realtime PCR法檢測柔腦膜內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)及miR-29c表達量，酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)檢測腦脊液(CSF)中Ⅰ型膠原前端肽(procollagen I C-

5、Terminal propeptide，PICP)含量，柔腦膜Masson染色觀察柔腦膜膠原纖維。
　　結(jié)果:
　　1.Realtime PCR檢測發(fā)現(xiàn)，空白慢病毒組柔腦膜中TGF-β1mRNA表達顯著高于假手術(shù)組(0.0209±0.0018VS0.0025±0.0008，P＜0.05)，miR-29c呈表達下調(diào)(0.0148±0.0054 VS0.0177±0.0031，P＜0.05)。
　　2.酶聯(lián)免疫吸附法檢測發(fā)

6、現(xiàn)，LV-rno-miRNA-29c組腦脊液中PICP表達低于空白慢病毒組[(181.79±14.34) VS(255.16±20.10)，P＜0.01] ug/L。
　　3.柔腦膜Masson染色發(fā)現(xiàn)，高表達miR-29c后纖維化指標(biāo)較空白慢病毒組顯著減小(77.64±6.43 vs108.29±7.69，P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.SAH模型大鼠柔腦膜內(nèi)TGF-β1表達升高，miR-29c表達降低。