大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒(絨毛)在顱內(nèi)的分布及結(jié)構(gòu)特點以及蛛網(wǎng)膜下腔出血后蛛網(wǎng)膜顆粒(絨毛)細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、本課題分兩部分，第一部分主要研究大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）在顱內(nèi)的分布及其結(jié)構(gòu)特點；第二部分探討大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）細(xì)胞凋亡在蛛網(wǎng)膜下腔出血（SubarachnoidHemorrhage，SAH）后的表達。
　　 第一部份大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）在顱內(nèi)的分布及其結(jié)構(gòu)特點
　　 目的：
　　 明確大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）在顱內(nèi)的分布及其結(jié)構(gòu)特點，為實驗取材及其相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
　　 材料與方法：
　　

2、采用26只健康清潔的成年Wistar大鼠作為實驗動物。10只用于蛛網(wǎng)膜下腔注射亞甲藍液研究蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）的分布情況，手術(shù)做寰枕部直切口，暴露寰枕筋膜，1ml注射器刺入寰枕筋膜，進入小腦延髓池，抽出腦脊液0.1ml后，再緩慢注入亞甲藍液0.15ml，1.5小時后取材觀察。8只用于蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）的HE染色研究，動物經(jīng)心臟灌注4％多聚甲醛后取材，石蠟包埋，從左到右軸位連續(xù)切片，每張切片厚0.5μm，間隔5張取片1張，光鏡下觀察、采集圖

3、片。8只用于電子顯微鏡的研究，動物經(jīng)灌注2％戊二醛后取材，經(jīng)固定、修快，制片后，電子顯微鏡下觀察、照相。
　　 結(jié)果：
　　 （1）通過大鼠蛛網(wǎng)膜下腔注射亞甲藍的方法，我們發(fā)現(xiàn)注入亞甲藍后大鼠蛛網(wǎng)膜下腔廣泛藍染，每只大鼠橫竇內(nèi)均有很明顯的燃料濃集區(qū)，而其余部分燃料濃集很少，說明大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）主要分布在橫竇內(nèi)。
　　 （2）大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）HE染色的結(jié)果發(fā)現(xiàn)：大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）具有最外層的內(nèi)皮細(xì)胞

4、層，纖維囊，蛛網(wǎng)膜細(xì)胞層，以及中央核。其形態(tài)及不規(guī)則，有的呈球形，有的則以分葉狀或匍匐生長。
　　 （3）通過連續(xù)切片統(tǒng)計分析，大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）主要分布在橫竇兩側(cè)中部偏內(nèi)的位置。
　　 （4）掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示：大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）主要成簇分布，數(shù)目不等。大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）上皮間存在裂隙和小孔洞，在上皮間可見微絨毛和球樣突起，微絨毛分布不均勻，可見聚集成簇的花樣結(jié)構(gòu)。
　　 （5）透射電子顯微

5、鏡觀察結(jié)果顯示：在大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）表面的內(nèi)皮細(xì)胞的表面，可以見到伸向竇腔的胞質(zhì)突起和質(zhì)膜小泡。
　　 結(jié)論：
　　 （1）大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）與人蛛網(wǎng)膜顆粒具有基本相同的結(jié)構(gòu)（具有內(nèi)皮細(xì)胞層、纖維囊、蛛網(wǎng)膜細(xì)胞層和中央核）。大鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）主要位于橫竇兩側(cè)中部偏內(nèi)的部分。
　　 （2）電鏡研究的結(jié)果說明了蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）的微細(xì)結(jié)構(gòu)，這些支持了腦脊液吸收入血的兩種機制。
　　 第二部分大鼠蛛

6、網(wǎng)膜顆粒（絨毛）細(xì)胞凋亡在蛛網(wǎng)膜下腔出血后的表達
　　 目的：
　　 通過動物實驗分析蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）細(xì)胞的凋亡情況，為進一步研究蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后治療方案的選擇提供思路。
　　 材料與方法：
　　 48只健康清潔成年Wistar大鼠，隨機分為A、B、C、D、E、F6組，每組8只。A組為對照組，不做任何處理，B、C、D、E、F5組為實驗組，經(jīng)血管內(nèi)穿刺出血，制作蛛網(wǎng)膜下

7、腔出血（SAH）模型。對照組大鼠10天取材，實驗組按1天、3天、5天、7天、10天取材。手術(shù)做大鼠頸部正中切口，分離暴露大鼠頸總動脈、頸內(nèi)動脈、頸外動脈及其在頸部的分支，電凝阻斷其各分支動脈。分離迷走神經(jīng)，小動脈夾阻斷頸總動脈、頸內(nèi)動脈，結(jié)扎頸外動脈并剪斷，在其近心端向頭顱方向插入帶尖尼龍線拴，打開動脈夾，刺破顱內(nèi)動脈，制作出血模型。所有大鼠在各時間點灌注-固定后取材（對照組于10天取材）。選取橫竇制成石蠟切片，采用三磷酸脫氧尿嘧啶缺口

8、末端標(biāo)記染色法（TUNEL法）觀察蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）的細(xì)胞凋亡情況并計數(shù)，進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 蛛網(wǎng)膜下腔出血后缺口末端標(biāo)記染色法研究鼠蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示：A組蛛網(wǎng)膜顆粒（絨毛）偶見凋亡細(xì)胞，B、C、D、E、F5組中隨著出血后時間的延長凋亡細(xì)胞逐漸增多，其中蛛網(wǎng)膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、纖維細(xì)胞均有凋亡。
　　 結(jié)論：
　　 蛛網(wǎng)膜下腔出血后，由于出血、缺血、炎癥等反應(yīng)過程，使蛛網(wǎng)