RO25-6981對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后認(rèn)知功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：NR2B在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后不同腦組織中的表達(dá)研究
　　目的：建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH，subarachnoid hemorrhage）模型，觀察N-甲基-D-天門冬氨酸受體亞單位NR2B在不同腦組織中的表達(dá)變化。
　　方法：42只成年健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常組、對(duì)照組、SAH后1天（Day1）、3天（Day3）、5天（Day5）、7天（Day7）、14天（Day14）共7組，每組6只大鼠。經(jīng)大鼠自體

2、尾動(dòng)脈（股動(dòng)脈）非肝素化動(dòng)脈血注入視交叉池致蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。分別在蛛網(wǎng)膜下腔出血后1、3、5、7、14天后處死大鼠，取大腦顳葉皮層、海馬組織、小腦組織做標(biāo)本，Western blot及免疫組化分析測(cè)定NR2B的表達(dá)。
　　結(jié)果：Western blot結(jié)果顯示：正常組和對(duì)照組中，NR2B在大腦皮層、海馬組織及小腦組織中的蛋白水平正常表達(dá)；在大腦皮層、海馬組織及小腦組織中，SAH后24小時(shí)的蛋白表達(dá)降低最為明顯（P<0.01）；

3、在大腦皮層中SAH后3-5天的蛋白水平明顯降低(第3天P<0.05，第5天P<0.05)；在海馬組織中SAH后3-7天的蛋白水平明顯降低(第3天P<0.01，第5天P<0.05，第7天P<0.05)；在小腦組織中SAH后3-7天的蛋白水平明顯降低(第3天P<0.01，第5天P<0.01，第7天P<0.05)；SAH后14天NR2B的蛋白表達(dá)與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)。免疫組化（NR2B蛋白免疫反應(yīng)性主要在神經(jīng)元細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)棕色黃

4、染代表陽(yáng)性）結(jié)果顯示：在大腦皮層、海馬組織及小腦組織中，正常組及對(duì)照組NR2B的陽(yáng)性率較高，SAH后24小時(shí)陽(yáng)性率降低最為明顯（P<0.01）；在大腦皮層中SAH后3-7天陽(yáng)性率明顯降低（第3、5天 P<0.01，第7天 P<0.05），SAH后14天與對(duì)照組相比陽(yáng)性率無(wú)明顯差異(P>0.05)；在海馬組織中SAH后3-5天NR2B陽(yáng)性率明顯降低(P<0.05)，SAH后7-14天與對(duì)照組相比陽(yáng)性率無(wú)明顯差異(P>0.05)；在小腦組織

5、中SAH后3-7天陽(yáng)性率明顯降低（第3、5天P<0.01，第7天 P<0.05），SAH后14天NR2B陽(yáng)性率趨于正常(P>0.05)。
　　結(jié)論：1. N-甲基-D-天門冬氨酸受體亞單位NR2B在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型后的1-7天中，大腦皮層、海馬組織及小腦組織中蛋白的表達(dá)存在不同程度的降低，以24小時(shí)最為明顯，至14天時(shí)基本恢復(fù)正常。2.大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型中，NR2B在不同腦組織中的蛋白表達(dá)存在差異，以大腦皮層最為明顯，海

6、馬組織次之，小腦組織最不明顯。
　　第二部分：RO25-6981對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后認(rèn)知功能的影響
　　目的：蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH，subarachnoid hemorrhage）后NMDA受體NR2B亞基的拮抗劑RO25-6981對(duì)大鼠認(rèn)知功能的影響及其作用機(jī)制的研究。
　　方法：72只成年健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為四組：正常組、SAH組、安慰劑組和 RO25-6981組，經(jīng)大鼠自體尾動(dòng)脈（股動(dòng)脈）非肝素化動(dòng)脈血

7、注入視交叉池致蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，RO25-6981在造模前30分鐘以10mg/kg腹腔注射，觀察SD大鼠行為功能變化，進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，48小時(shí)后處死大鼠，取顳底皮層腦組織做標(biāo)本，采用免疫組化法檢測(cè)NR2B表達(dá)，在SAH后48小時(shí)開始進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)測(cè)試大鼠認(rèn)知功能的能力。
　　結(jié)果：1.與對(duì)照組相比，SAH組大鼠的神經(jīng)認(rèn)知功能降低，食欲及活動(dòng)能力降低（P<0.05）；RO25-6981組與安慰劑組相比，大鼠的神經(jīng)認(rèn)知

8、功能明顯降低，食欲及活動(dòng)能力明顯降低（P<0.01）；SAH組和安慰劑組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.免疫組化（NR2B蛋白的免疫反應(yīng)主要存在于神經(jīng)元細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)顏色呈棕色黃染則代表為陽(yáng)性）結(jié)果顯示：對(duì)照組NR2B的陽(yáng)性率較高；與對(duì)照組相比，SAH組NR2B陽(yáng)性率明顯降低(P<0.01)；SAH組與安慰劑組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)；RO25-6981組中NR2B陽(yáng)性率顯著低于SAH組及安慰劑組(P<0.01)。3.在Morris水迷宮試驗(yàn)