三羥異黃酮通過激活PPAR調(diào)控UGTs表達(dá)的保肝機(jī)理研究.pdf

1、目的:大豆異黃酮是大豆等豆科植物在它們的生長過程中所產(chǎn)生的一類次級代謝產(chǎn)物,三羥異黃酮(Genistein,Gen)是大豆異黃酮的重要活性成分,具有多種生物學(xué)功能。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGTs)是存在于人和動物肝臟中的一種重要的Ⅱ相代謝酶,能夠催化許多外源和內(nèi)源化合物的代謝解毒。
　　本文通過細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)來研究Gen對肝細(xì)胞的保護(hù)作用,以及Gen對UGTs活性的影響及其作用機(jī)理,研究過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)在

2、Gen誘導(dǎo)調(diào)控UGTs活性中的作用,為Gen保肝解毒及其對Ⅱ相代謝酶UGTs調(diào)控的機(jī)制提供依據(jù)。
　　方法:利用MTT法檢測不同劑量Gen及PPAR激活劑分別對對乙酰氨基酚(APAP)誘導(dǎo)的人正常肝細(xì)胞L-02及肝癌細(xì)胞HepG2、Hep3b活性的影響,研究Gen對正常肝細(xì)胞及癌細(xì)胞在APAP毒性誘導(dǎo)下的不同作用效果;利用高效液相色譜法研究 Gen、PPAR激活劑及抑制劑對 APAP在不同細(xì)胞內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化情況的影響,通過測定細(xì)胞培

3、養(yǎng)液中APAP剩余量及細(xì)胞裂解液中葡萄糖醛酸化對乙酰氨基酚(APAP-GLu)生成量,對Gen及PPAR激活劑促進(jìn)APAP代謝轉(zhuǎn)化、保肝解毒的作用進(jìn)行評價;以4-NP為底物,分光光度法檢測Gen、PPAR激活劑及抑制劑分別對不同細(xì)胞 UGTs酶活性的影響;利用實(shí)時熒光定量 PCR法檢測Gen及PPAR激活劑對三種細(xì)胞中UGT1A1、 UGT1A6、UGT1A9、UGT1A10及孤兒核受體PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)的影響,同時采

4、用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對三種細(xì)胞中UGT1A、PPARα、PPARγ蛋白含量進(jìn)行了測定,探究Gen調(diào)控UGTs活性的機(jī)理。
　　結(jié)果:(1)與空白對照組相比,Gen可以提高細(xì)胞對APAP毒性的抵抗能力,減輕APAP造成的損害;Gen處理或激活PPARs能夠提高APAP在細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖醛酸化作用,促進(jìn)其代謝轉(zhuǎn)化;抑制PPARs的細(xì)胞環(huán)境不利于APAP的葡萄糖醛酸化反應(yīng);(2)Gen、PPARα激活劑、PPARγ激活劑能不同程度提高細(xì)胞U

5、GTs活性,而PPARα抑制劑、PPARγ抑制劑會降低UGTs活性,其中PPARγ激活劑與抑制劑作用效果較小;(3)Gen、PPARα激活劑、PPARγ激活劑能不同程度提高細(xì)胞UGT1A1、 UGT1A6、UGT1A9及孤兒核受體PPARα、PPARγmRNA表達(dá),同時增加細(xì)胞UGT1A、PPARα及PPARγ蛋白含量。
　　結(jié)論:Gen對APAP引起的細(xì)胞損害有一定的改善作用,這可能與Gen經(jīng)由PPARs上調(diào)代謝APAP的主要I