三羥異黃酮調(diào)控肝臟UGTs活性機(jī)理研究.pdf

1、目的：三羥基異黃酮（Gen）是一種廣泛存在于大豆等豆科植物中的次級(jí)代謝產(chǎn)物，研究發(fā)現(xiàn)其具有抗癌、抗氧化等多種生物學(xué)功能。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGTs)是一類存在于動(dòng)物肝臟中的重要的Ⅱ相代謝酶，能夠催化肝臟代謝解毒作用，本文研究了Gen通過(guò)誘導(dǎo)肝臟UGTs酶活從而促進(jìn)肝臟解毒效果的作用及其作用機(jī)理。
　　方法：利用對(duì)乙酰氨基酚（APAP）誘導(dǎo)肝損傷小鼠模型進(jìn)行三羥基異黃酮肝臟保護(hù)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)檢測(cè)小鼠肝臟丙二醛（MDA）含量、肝

2、臟總抗氧化能力（T-AOC）、血清谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活(ALT)、肝臟谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活(GSH-Px)、肝臟與血清中的谷胱甘肽(GSH)含量等生化指標(biāo)對(duì)Gen對(duì)APAP誘導(dǎo)小鼠肝損傷的保護(hù)作用進(jìn)行評(píng)價(jià)；利用經(jīng)過(guò)Gen處理后的小鼠肝臟制備微粒體并進(jìn)行體外孵育實(shí)驗(yàn)，以4-MU為底物檢測(cè)微粒體中UGTs酶的活性，并進(jìn)一步進(jìn)行了APAP在體外微粒體孵育反應(yīng)中的酶促轉(zhuǎn)化檢測(cè)；人體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)利用MTT法檢測(cè)了APAP對(duì)受不同濃度Gen保護(hù)的人肝癌細(xì)

3、胞HepG2、Hep3b以及人正常肝細(xì)胞L-02的活性影響；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Gen對(duì)三種細(xì)胞中UGTs同工酶UGT1A1、UGT1A6、UGT1A9及核轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子（Nrf2）和Kelch樣ECH聯(lián)合蛋白1（Keap1）的mRNA的表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討Gen誘導(dǎo)UGTs活性表達(dá)以及作用機(jī)理。
　　結(jié)果：（1）與模型組比較，Gen誘導(dǎo)后的實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟MDA水平、血清ALT水平顯著降低，肝臟T-AOC、肝臟GSH-Px活

4、性顯著增高，且表現(xiàn)有劑量依賴效應(yīng)；Gen誘導(dǎo)組小鼠的肝臟及血清中GSH恢復(fù)速度高于模型組，24h后高、中劑量組的肝臟及血清GSH能恢復(fù)到對(duì)照正常水平；（2）Gen可以上調(diào)肝臟中UGTs的活性，并且能夠提高APAP在體外孵育反應(yīng)中的代謝轉(zhuǎn)化率；（3）Gen能提高細(xì)胞對(duì)APAP毒性的抵抗能力，減輕APAP對(duì)細(xì)胞的損傷作用；Gen顯示出上調(diào)UGT1A1、UGT1A6、UGT1A9及Nrf2的mRNA的表達(dá)量，下調(diào)Keap1表達(dá)的作用。