三羥異黃酮抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721侵襲轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中列第三位，僅次于胃癌和食管癌。我國每年約有11萬人死于肝癌，占全球肝癌死亡人數(shù)的45％。值得注意的是世界各地原發(fā)性肝癌發(fā)病率有上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著人類的健康。手術(shù)切除仍是目前根治原發(fā)性肝癌的最佳方法，但大多數(shù)患者在明確診斷時(shí)已失去手術(shù)機(jī)會(huì)，其原因主要是癌細(xì)胞已發(fā)生了肝內(nèi)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致手術(shù)切除或肝移植術(shù)后表現(xiàn)出較高的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率。因此，尋求有效的藥物進(jìn)行綜合治療，以改善原發(fā)性

2、肝癌的預(yù)后，降低其轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，提高患者的生活質(zhì)量十分必要。目前主要的化療藥物多具有細(xì)胞毒性，副作用大，人體耐受性差。而提純于天然動(dòng)植物的低毒、高效的抗癌活性物質(zhì)的開發(fā)和利用已成為近年來國內(nèi)外原發(fā)性肝癌治療研究的熱點(diǎn)。 三羥異黃酮是一種純化于豆制品的植物雌激素，是大豆異黃酮的主要成分之一，具有廣泛的生物學(xué)作用。眾所周知，大豆異黃酮的抗癌作用已得到國內(nèi)外的公認(rèn)。近年來的大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、體外研究以及流行病學(xué)調(diào)查均表明，作為大豆異黃酮中最

3、為重要的一種活性物質(zhì)，三羥異黃酮可作為一種潛在的腫瘤化學(xué)預(yù)防劑。它在體外能抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，使細(xì)胞生長(zhǎng)周期停滯于G2/M期，并且可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；在動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)中能抑制腫瘤細(xì)胞增殖和新生血管形成，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移均顯示了良好的治療作用。作為一個(gè)很有潛力的抗腫瘤藥物，三羥異黃酮抗肝癌的作用也受到關(guān)注，其可能機(jī)制包括：①抑制蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性；②弱雌激素作用；③抗氧化作用；④抑制拓?fù)涿涪虻幕钚裕虎菡T導(dǎo)

4、細(xì)胞凋亡；⑥抑制細(xì)胞增殖；⑦抑制新生血管生成等。 近年來三羥異黃酮抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用頗受國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤重要的生物學(xué)特征，尤其轉(zhuǎn)移在臨床上為絕大多數(shù)腫瘤的致死因素。因此腫瘤轉(zhuǎn)移對(duì)癌癥治療是一種嚴(yán)重的挑戰(zhàn)。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤生長(zhǎng)發(fā)展中密不可分的相關(guān)過程。侵襲是指癌細(xì)胞侵犯和破壞周圍正常組織，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的過程。轉(zhuǎn)移是指侵襲中癌細(xì)胞遷移到特定組織器官并發(fā)展成為繼發(fā)性癌灶的過程。侵襲與轉(zhuǎn)移是同一過程中的兩個(gè)不同

5、階段，侵襲是轉(zhuǎn)移的前奏，轉(zhuǎn)移是侵襲的結(jié)果。腫瘤的形成和發(fā)展除與細(xì)胞自身基因突變所導(dǎo)致的原癌基因激活和(或)抑癌基因失活有關(guān)外，還受腫瘤細(xì)胞所處微環(huán)境變化的影響。細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)不僅是細(xì)胞賴以生存的場(chǎng)所，而且是細(xì)胞與細(xì)胞之間自分泌和旁分泌調(diào)節(jié)的必經(jīng)之路與緩沖地帶。ECM成分作為維持細(xì)胞微環(huán)境穩(wěn)態(tài)的物質(zhì)基礎(chǔ)，決定著細(xì)胞外刺激信號(hào)的性質(zhì)、強(qiáng)度與時(shí)空性。近年研究發(fā)現(xiàn)，ECM結(jié)構(gòu)與組成成分的變化是其影響細(xì)胞功能的重要方式，其變化很大程度上受基

6、質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的調(diào)節(jié)。MMPs是一類鋅離子依賴的內(nèi)肽酶，能降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的重要蛋白水解酶，在幾乎所有腫瘤組織中均存在MMPs高表達(dá)及高活性的現(xiàn)象。在腫瘤移植試驗(yàn)中，相對(duì)良性的移植瘤細(xì)胞可因MMPs的高表達(dá)而獲得惡性的性質(zhì)。相反，高度惡性的移植瘤細(xì)胞也可因MMPs表達(dá)或催化活性降低而減弱其侵襲力。MMPs在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用可概括如下：①破壞局部組織結(jié)構(gòu)，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)；②破壞基底膜屏障，利于腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移；③通過對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)

7、的改變，促進(jìn)腫瘤新生血管的形成。目前多數(shù)研究也表明，MMPs與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。MMPs在肝臟腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)以彌漫型或顆粒型局限于胞漿。目前在肝臟中研究較多的是MMP-2和MMP-9，它們己成為公認(rèn)的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白。根據(jù)作用底物不同，MMP-2和MMP-9屬于Ⅳ型膠原酶類，它們的分子量分別為72kD和92kD，主要降解基底膜的重要成分Ⅳ型膠原，另外還能降解明膠和纖粘蛋白。此外在MMPs家族中MMP-2和MMP-9還具有直接

8、促血管生成的作用。MMP-2缺陷小鼠的腫瘤血管生成和生長(zhǎng)速度均減慢，MMP-9可通過提高VEGF的生物可利用度而促進(jìn)腫瘤血管生成。 目的：探討三羥異黃酮對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721侵襲轉(zhuǎn)移的抑制作用及其可能的作用機(jī)制。 方法：應(yīng)用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721；Boydenchamber體外侵襲模型檢測(cè)細(xì)胞的體外侵襲能力；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)三羥異黃酮作用后肝癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP-2、MMP-9的表達(dá)