大豆三羥異黃酮通過PPAR調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的研究.pdf

1、目的:大豆異黃酮是大豆等豆科植物的次級代謝產(chǎn)物，三羥異黃酮(Gentistein，Gen)是大豆異黃酮的重要活性組成部分，研究發(fā)現(xiàn)其具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗癌、抗氧化等多種生物學功能。在脂質(zhì)代謝中表現(xiàn)出調(diào)控代謝酶表達與活性的生理功能。本論文通過細胞體外實驗來研究三羥異黃酮對脂質(zhì)代謝的調(diào)控作用，以及Gen對磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)含量的影響，研究過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)在Gen調(diào)控脂蛋白酯酶(LPL)基因表達中的作

2、用與激活途徑的機制規(guī)律，為大豆異黃酮在營養(yǎng)保健、預防代謝綜合癥、臨床藥理等領(lǐng)域的深入應用研究提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法:采用正常人肝細胞L-02、肝癌細胞HepG2、Hep3b和小鼠前脂肪細胞3T3-L14種細胞為實驗細胞，細胞分為空白組、模型組、Gen實驗組、陽性對照組(PPARs激動劑);模型組采用油酸(OA)誘導建立對照模型;利用MTT法檢測不同OA誘導對Gen及PPAR激動劑處理的人正常肝細胞L-02及肝癌細胞He

3、pG2、Hep3b和小鼠前脂肪細胞3T3-L1活性，研究不同濃度OA對四種細胞在Gen及PPAR激動劑處理下的不同作用效果以確定OA誘導最佳劑量;檢測OA處理不同時間后四種細胞培養(yǎng)液中ALT及AST的含量以確定OA作用的最佳時間，以油酸誘導最佳劑量、時間等參數(shù)來建立脂肪細胞模型;檢測Gen及PPAR激動劑對油酸誘導的脂肪化細胞中甘油三酯(TG)的含量，對Gen及PPAR激動劑調(diào)控TG的作用效果進行評價;雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法檢測Gen及P

4、PAR激動劑處理四種油酸誘導的脂肪化細胞培養(yǎng)液中AMPK含量變化;熒光定量PCR法檢測Gen及PPAR激動劑對四種脂肪化細胞中LPL及核受體PPARα、PPARγ的mRNA表達水平，同時采用酶聯(lián)免疫吸附試驗對四種細胞中PPARα、PPARγ蛋白含量進行了測定。
　　結(jié)果:(1)確定四種細胞的脂肪化誘導最佳OA濃度1mM及誘導時間48h可以建立脂肪化細胞模型;(2)Gen能提高AMPK濃度，且為劑量依賴性。Gen作用效果表現(xiàn)為PPA

5、Rα、PPARγ激動劑的作用方向一致;(3)Gen能提高細胞內(nèi)LPL及孤兒核受體PPARα、PPARγ的mRNA表達水平，增加細胞PPARα及PPARγ的蛋白含量。同樣Gen表現(xiàn)為PPARα、PPARγ激動劑的作用效果一致。
　　結(jié)論:Gen對OA誘導的細胞脂肪化有一定的調(diào)節(jié)改善作用，這可能與Gen經(jīng)由PPARs上調(diào)代謝TG的主要相關(guān)酶AMPK及LPL等的表達，增加了AMPK及LPL的活性從而促進細胞進行TG的代謝有關(guān);加入激動劑