全淋巴區(qū)電子線照射及淫羊藿苷治療MRL-lpr狼瘡小鼠療效觀察與機(jī)制探討.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種以全身免疫異常而導(dǎo)致多器官受累的自身免疫性疾病，其發(fā)病機(jī)制與病因尚不完全明確，可能與遺傳、環(huán)境、性激素、藥物及感染等因素有關(guān)。長期細(xì)胞毒性藥物結(jié)合糖皮質(zhì)激素治療已被實踐證明能有效阻止疾病的活動及減少腎臟損害，但其嚴(yán)重的副作用，如嚴(yán)重的嗜中性白血球減少癥，敗血癥，出血性膀胱炎，不孕不育，白血病，淋巴瘤，限制了它的綜合使用。全淋巴區(qū)照射最初作為治療霍奇金淋巴瘤的一種治療手段，被證實可以對細(xì)胞免疫產(chǎn)生一種持久的抑制作用。從

2、1980年起，全淋巴區(qū)照射開始應(yīng)用于對常規(guī)治療無效的難治性狼瘡腎炎，并且大多數(shù)患者在治療后病情都能得到一個持久的好轉(zhuǎn)。淫羊藿苷是小檗科淫羊藿屬植物淫羊藿的活性成分，其主要藥理活性為可以調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力和激素水平等。本次研究以系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型小鼠MRL/1pr作為研究對象，第一部分采用全淋巴區(qū)電子線照射治療MRL/1pr小鼠，并以地塞米松治療MRL/1pr狼瘡小鼠作為陽性對照來觀察全淋巴區(qū)電子線照射治療MRL/1pr小鼠的療效，并通過流式

3、細(xì)胞檢測法檢測不同組小鼠脾臟的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平，對其機(jī)制進(jìn)行初步探討。第二部分應(yīng)用淫羊藿苷灌胃治療MRL/1pr狼瘡小鼠，觀察其病情變化，并檢測T淋巴細(xì)胞雌激素受體α的變化。
　　 第一部分:
　　 目的:觀察全淋巴區(qū)電子線照射治療MRL/1pr狼瘡小鼠療效，并探討其與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.將18只4個月大的MRL/1pr小鼠隨機(jī)分為A、B、C三組，每組6只，雌雄各半，A組每日予生

4、理鹽水0.5ml腹腔注射，每日1次，連續(xù)2周。B組用電子線予全身淋巴結(jié)照射治療，2Gy/天，每周5次，連續(xù)兩周。C組予地塞米松1mg/kg腹腔注射，每日1次，連續(xù)兩周。實驗結(jié)束后兩周測各項指標(biāo)。
　　 2.代謝籠法收集小鼠24小時尿液，考馬斯亮藍(lán)法測各組小鼠的24小時尿蛋白。
　　 3.ELISA法測各組小鼠的ANA及抗ds-DNA抗體水平。
　　 4.免疫熒光法觀察各組小鼠的IgG抗體在腎臟的沉積情況。

5、　　 5.PAS染色法觀察各組小鼠的腎臟情況。
　　 6.流式細(xì)胞儀測定各組小鼠脾臟細(xì)胞中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞所占比例。
　　 結(jié)果:
　　 1.電子線放射治療能降低小鼠尿蛋白含量。
　　 2.電子線放射治療能減少小鼠血清中抗核抗體ANA及抗小鼠雙鏈DNA(ds-DNA)抗體含量。
　　 3.直接免疫熒光顯示B與C組小鼠腎小球內(nèi)IgG免疫球蛋白沉積較A組減少，強(qiáng)度較弱，B、C兩組無明顯差異。
　　

6、 4.PAS染色可見B組與C組腎臟病變較A組減輕，B、C兩組無明顯差異。
　　 5.流式細(xì)胞儀檢測B、C兩組的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞所占比例較A組升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.全淋巴區(qū)電子線照射治療能有效緩解MRL/1pr狼瘡小鼠的病情，降低小鼠尿蛋白、血清抗核抗體、雙鏈DNA抗體水平，對腎臟病理改變亦有恢復(fù)作用。
　　 2.全淋巴區(qū)電子線照射治療機(jī)制可能與提高了體內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞所占的比例有關(guān)。

7、
　　 第二部分:
　　 目的:淫羊藿苷治療MRL/1pr狼瘡小鼠療效觀察及與雌激素受體α的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.將12只4個月大的雌性MRL/1pr小鼠隨機(jī)分為2組，每組6只，設(shè)為A、B組。A組為陰性對照組，B組為淫羊藿苷灌胃治療組。A組予0.9％氯化鈉注射液0.5ml灌胃，每日一次，連續(xù)10日。B組予淫羊藿苷20mg/kg灌胃，每日一次，連續(xù)10日。
　　 2.ELISA法測各組小鼠

8、的抗ds-DNA抗體及血清IL-6、TNF-α水平。
　　 3.尼龍柱法分離小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞。
　　 4.實時定量PCR檢測小鼠T淋巴細(xì)胞ERα的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.T細(xì)胞尼龍毛柱成功分離了小鼠的T淋巴細(xì)胞。
　　 2.淫羊藿苷灌胃組抗小鼠雙鏈DNA(ds-DNA)抗體及細(xì)胞因子IL-6、TNF-α的表達(dá)水平較陰性對照組小鼠升高(P＜0.05)。
　　 3.淫羊藿苷灌胃組小鼠