三氧化二砷對(duì)MRL-lpr狼瘡鼠脾臟淋巴細(xì)胞組蛋白酰化的影響.pdf

1、目的：
　　 1．探討三氧化二砷對(duì)MRL/lpr狼瘡鼠脾臟淋巴細(xì)胞組蛋白H3乙?；降挠绊憽?br>　　 2．探討三氧化二砷對(duì)組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(HATs)和組蛋白去乙?；?HDACs)活性的影響。
　　 方法：
　　 1．小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)分組
　　 將20周齡MRL/lpr狼瘡鼠和正常C57BL/6J小鼠無菌條件下取出脾臟，制配成脾臟淋巴細(xì)胞懸液。體外經(jīng)PHA-p(20μg/ml)和IL

2、-2(1000IU/ml)常規(guī)刺激48h后，隨機(jī)分為3組：(1)ATO組；(2)曲古抑菌素(TrichostatinA，TSA)組；(3)RPMI1640組，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
　　 2．組蛋白提取與Western印跡分析
　　 采用酸抽提法提取組蛋白。Western印跡法檢測乙?；M蛋白H3的表達(dá)量。
　　 3．核蛋白提取與HAT和HDAC活性測定
　　 提取小鼠脾臟淋巴細(xì)胞核蛋白。比色分析組蛋白去乙?；?/p>

3、酶活性試劑盒測定脾臟淋巴細(xì)胞核蛋白HDAC活性。比色分析組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶活性試劑盒測定脾臟淋巴細(xì)胞核蛋白HAT活性。
　　 結(jié)果：
　　 1．MRL/lpr狼瘡鼠中RPMI1640組、ATO組、TSA組組蛋白H3乙?；椒謩e為0.46±0.06、0.87±0.02、1.6±0.13(n=3)，且差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；
　　 2．MRL/lpr狼瘡鼠中RPMI1640組、ATO組、TSA組H

4、DAC活性分別為(23.73±5.28)μmol/L、(14.47±2.89)μmol/L、(11.83±2.10)μmol/L，表明ATO和TSA能明顯降低HDAC活性，P值分別為0.001、0.000(n=6);
　　 3．MRL/lpr狼瘡鼠中RPMI1640組、ATO組、TSA組HAT活性分別為(1.34±0.49)μmol/L、(1.38±0.60)μmol/L、(1.24±0.35)μmol/L，三組間兩兩相比差異無

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以上分別為P＞0.05(n=6);
　　 4．以C57BL/6J空白對(duì)照組(RPMI1640)HDAC/HAT的比值作為樣品校正，其值設(shè)置為100％(100％±26％)。則MRL/lpr狼瘡鼠RPMI1640組、ATO組、TSA組HDAC/HAT的比值分別為444％±81％、282％±101％、240％±66％。ATO組與TSA組HDAC/HAT的比值均低于RPMI1640組，P分別為0.004和0.001（n=6）

6、：
　　 5．C57BL/6J小鼠中，ATO組和RPMI1640組之間以上指標(biāo)均無差異(組蛋白乙酰化水平：依次為0.71±0.09、0.75±0.04，P=0.489;HDAC:(16.55±3.68)μmol/L、(17.72±3.92)μmol/L，P=0.550;HAT:(4.29±0.99)μmol/L、(4.36.±1.00)μmol/L,P=0.931;HDAC/HAT:94％±23％、100％±26％,P=0.56