OBF-1對(duì)MRL-lpr小鼠抗體分泌細(xì)胞產(chǎn)生及自身免疫發(fā)展的功能研究.pdf

1、OBF-1(Oct binding factor-1)又稱OCA-B或Bob-1，是B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄共激活因子。已發(fā)現(xiàn)OBF-1能調(diào)節(jié)B細(xì)胞發(fā)育和功能，在OBF-1缺陷小鼠中，B細(xì)胞成熟的多個(gè)階段受到影響，完全破壞生發(fā)中心的形成，導(dǎo)致體液免疫缺陷。MRL/MpJ-Fas<'lpr/lpr>(MRL-lpr)小鼠以產(chǎn)生自身抗體和免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎小球腎炎為特征，是研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡的主要模型之一。本研究構(gòu)建了OBF-1 缺陷MRL-lpr

2、小鼠和OBF-1野生MRL-lpr小鼠，并在這兩種模型小鼠的基礎(chǔ)上，研究OBF-1缺陷對(duì)抗體分泌細(xì)胞產(chǎn)生及自身免疫發(fā)展的影響。 1 OBF-1缺陷MRL-lpr小鼠及OBF-1野生MRL-lpr小鼠模型的建立將MRL-lpr小鼠與OBF-1缺陷小鼠進(jìn)行雜交，產(chǎn)生子一代小鼠(F1)，再將F1小鼠雌雄配對(duì)產(chǎn)生子二代小鼠(F2)，用PCR對(duì)F2小鼠進(jìn)行基因型鑒定(OBF-1和Fas基因)，從中挑選出OBF-1<'-/->Fas<'-/

3、->小鼠，再與親代小鼠MRL-lpr回交。經(jīng)如此雜交-回交6～8代，獲得OBF-1缺陷MRL-lpr小鼠(OBF-1<'-/->Fas<'-/->)及OBF-1野生MRL-lpr小鼠(OBF-1<'+/+>Fas<'-/->)。 2 OBF-1缺陷對(duì)MRL-lpr小鼠抗體分泌細(xì)胞產(chǎn)生和自身免疫發(fā)展的影響2．1 OBF-1缺陷對(duì)MRL-lpr小鼠自身免疫發(fā)展的影響選用3-4月齡基因型為OBF-1<'+/+>Fas<'-/->和OB

4、F-1<'-/->Fas<'-/->小鼠各6只，利用夾心ELISA法檢測(cè)每只小鼠血清中所有免疫球蛋白、抗雙鏈DNA抗體(ds-DNA抗體)和抗核抗體(ANA)，結(jié)果表明OBF-4<'+/+>Fas<'-/->小鼠血清中的所有的免疫球蛋白顯著增高，尤其是IgG亞類(IgG1、Ig2a、IgG3、IgG2b)，其中IgG2a含量最低有5000μg/mL，而OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠血清IgG各亞類含量均降低，其中IgG2a

5、含量最高僅為200μg/mL。OBF-1<'+/+>Fasb<'-/->小鼠血清中能檢測(cè)出自身抗體(抗ds-DNA抗體及抗核抗體)，而在OBF--<'-/->Fas<'-/->小鼠不能檢測(cè)到，以上結(jié)果顯示表明MRLlpr小鼠OBF-1缺陷可使所有免疫球蛋白水平顯著降低，消除自身抗體。免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠腎小球有IgG和補(bǔ)體C3沉積，而OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠腎臟沒(méi)有沉積；PAS

6、法染色發(fā)現(xiàn)OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠腎小囊腔增大，并形成新月體，而OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠。腎臟沒(méi)有上述現(xiàn)象。結(jié)果說(shuō)明OBF-1缺陷能抑制MRL-lpr小鼠免疫復(fù)合物介導(dǎo)的血管球性腎炎的發(fā)生。 2．2 OBF-1缺陷對(duì)MRL-lpr小鼠自身抗體產(chǎn)生缺陷的機(jī)制通過(guò)ELISPOT檢測(cè)OBF-1缺陷對(duì)MRL-lpr小鼠抗體分泌細(xì)胞的影響，OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠脾臟檢測(cè)到大量I

7、gG抗體分泌細(xì)胞(約820個(gè)斑點(diǎn)/10<'5>脾細(xì)胞)，而OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠脾臟只檢測(cè)到少量IgG抗體分泌細(xì)胞(約5個(gè)斑點(diǎn)/10<'5>脾細(xì)胞)，骨髓中檢測(cè)結(jié)果與脾臟類似，結(jié)果顯示OBF-1對(duì)MRL-lpr小鼠抗體分泌細(xì)胞的產(chǎn)生是必需的。 通過(guò)半定量RT-PCR法檢測(cè)對(duì)漿細(xì)胞特異性基因Blimp-1，Xbp-1，Irf-4，Bcl-6和J鏈的表達(dá)，結(jié)果表明OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠相比

8、，OBF-1<'-/->Fas<'-/->小鼠Irf-4、xbp-1、Blimp-1、Bcl-6 mRNA水平?jīng)]有明顯差別，而J鏈mRNA顯著降低。為明確J鏈轉(zhuǎn)錄是否依賴OBF-1，進(jìn)而檢測(cè)對(duì)照小鼠OBF-1<'+/+>小鼠和OBF-1<'-/->小鼠脾臟B細(xì)胞J鏈的mRNA表達(dá)，兩者mRNA水平無(wú)顯著差別，提示OBF-1<'-/->MRL-lpr小鼠J鏈的轉(zhuǎn)錄抑制可能與lpr和OBF-1的相互作用有關(guān)。以上結(jié)果表明OBF-1不能在mR

9、NA水平上影響MRL-lpr小鼠抗體分泌細(xì)胞的形成。 進(jìn)而利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)分析B細(xì)胞發(fā)育，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與OBF-1<'+/+>Fas<'-/->小鼠相比，OBF-1<'-/->MRL-lpr小鼠脾臟和骨髓中的未成熟B細(xì)胞(CD19<'+>IgM<'+>)和成熟B細(xì)胞(CD19<'+>IgD<'+>)數(shù)量沒(méi)有減少，說(shuō)明MRL-lpr小鼠OBF-1缺失不影響B(tài)細(xì)胞的發(fā)育。OBF-1<'-/->MRL-lpr小鼠脾臟和淋巴結(jié)中CD3