潑尼松抑制MRL-MpSlac-lpr小鼠漿細(xì)胞分化的作用及部分機(jī)制.pdf

1、目的：
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡是以大量B細(xì)胞的異常活化和漿細(xì)胞的異常增生、產(chǎn)生大量自身抗體為主要特征的自身免疫病。潑尼松作為經(jīng)典的糖皮質(zhì)激素,是自身免疫疾病的基礎(chǔ)用藥。許多研究主要從受體角度出發(fā),研究其強(qiáng)大的抗炎免疫作用,但是關(guān)于其對(duì)于漿細(xì)胞分化的作用卻很少有報(bào)道。本文以MRL/MpSlac-lpr(MRL/lpr)小鼠為研究對(duì)象,以潑尼松為研究藥物,揭示潑尼松對(duì)B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化的作用及部分機(jī)制。
　　方法：
　　將MR

2、L/lpr小鼠隨機(jī)分為三組,分別為模型組(n=10),潑尼松2個(gè)劑量組(2.5 mg/kg、5.0 mg/kg)(n=8),另設(shè)BALB/c小鼠為正常對(duì)照組(n=8),潑尼松每日灌胃給藥13周,正常組和模型組給予同等量的生理鹽水。
　　給藥13周,檢測(cè)MRL/lpr小鼠給藥前后尿蛋白水平,生存曲線以及脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)潑尼松對(duì) MRL/lpr小鼠的治療作用。用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbe

3、nt assay,ELISA)檢測(cè)小鼠血清中抗雙鏈DNA抗體(anti-dsDNA antibody)、抗核抗體(anti-nuclear antibody,ANA)和IL-21的水平。用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometery,FCM)檢測(cè)漿細(xì)胞亞群的變化。用實(shí)時(shí)免疫熒光定量PCR(Real-time Quantitative PCR Detecting System,qPCR)法檢測(cè)脾臟組織B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)成熟蛋白-1(B-lymp

4、hocyte induced maturation protein-1,Blimp-1)以及B細(xì)胞淋巴瘤-6(B-cell lymphoma-6,Bcl-6)基因在給藥前后的變化。用蛋白印跡法(Western blot,WB)檢測(cè)給藥前后脾臟和腎臟Blimp-1與Bcl-6蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.潑尼松對(duì)MRL/lpr小鼠生存率的影響
　　在第8周齡時(shí)開(kāi)始給藥。隨著年齡的增加,MRL/lpr模型小鼠表現(xiàn)出

5、逐漸加重的間質(zhì)性腎炎。在14周齡,模型組小鼠出現(xiàn)第一例死亡,而潑尼松小劑量組則在給藥第9周(17周齡)出現(xiàn)第一例死亡。在給藥13周(21周齡)時(shí),模型組的存活率已降為50.0％,潑尼松小劑量(2.5 mg/kg)組為75.0%,潑尼松大劑量(5.0 mg/kg)組為87.5%,正常對(duì)照組為100%(8/8),但是各組之間未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.潑尼松給藥對(duì)MRL/lpr小鼠尿蛋白水平的影響
　　與正常BALB/c組相比,M

6、RL/lpr模型小鼠尿蛋白的水平顯著升高。潑尼松大劑量(5.0 mg/kg)給藥10周之后,尿蛋白水平出現(xiàn)明顯而持續(xù)的降低。
　　3.潑尼松給藥對(duì)MRL/lpr小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響
　　與正常小鼠相比,MRL/lpr模型小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著增加。潑尼松大劑量(5.0mg/kg)給藥后,脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著降低。
　　4.潑尼松給藥對(duì)MRL/lpr小鼠血清抗dsDNA抗體、ANA和IL-21的影響

7、>　　與正常小鼠相比,MRL/lpr模型小鼠血清抗dsDNA抗體和ANA水平顯著升高。潑尼松兩個(gè)劑量給藥后均可降低血清ANA的水平,但對(duì)于抗dsDNA抗體卻未見(jiàn)明顯的影響。潑尼松兩個(gè)劑量給藥后均可降低 MRL/lpr小鼠血清中顯著升高的IL-21。
　　5.潑尼松給藥對(duì)MRL/lpr小鼠漿細(xì)胞亞群的影響
　　與正常組相比,MRL/lpr模型小鼠 CD19的表達(dá)顯著降低,漿細(xì)胞前體(CD19+CD27+CD38+)和漿細(xì)胞(C

8、D19-CD138+)的比例明顯增加。潑尼松大劑量(5.0mg/kg)給藥后,可顯著降低脾臟漿細(xì)胞前體的比例。潑尼松兩個(gè)劑量給藥均可顯著降低脾臟漿細(xì)胞的比例。
　　6.潑尼松給藥后對(duì)MRL/lpr小鼠脾臟漿細(xì)胞表面標(biāo)志CD138的影響
　　與正常小鼠相比,MRL/lpr模型小鼠CD138陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增加,潑尼松給藥后可顯著降低CD138陽(yáng)性細(xì)胞的比例。
　　7.潑尼松給藥對(duì)MRL/lpr小鼠脾臟組織Blimp-1和B

9、cl-6 mRNA表達(dá)的影響
　　與正常小鼠相比,MRL/lpr模型小鼠脾臟組織Blimp-1和Bcl-6 mRNA的表達(dá)水平均顯著增高,經(jīng)過(guò)潑尼松治療后均明顯降低。
　　8.潑尼松給藥對(duì)MRL/lpr小鼠脾臟組織和腎臟組織Blimp-1和Bcl-6蛋白表達(dá)的影響
　　與正常小鼠相比,MRL/lpr模型小鼠脾臟和腎臟組織中Blimp-1表達(dá)水平均較高,給藥后可以顯著降低脾臟中Blimp-1的表達(dá);但是對(duì)腎臟Blimp-

10、1的表達(dá)影響不明顯。與正常小鼠相比,MRL/lpr模型小鼠脾臟中Bcl-6的表達(dá)明顯增加,潑尼松給藥可顯著降低其表達(dá);但是在腎臟組織中,各組Bcl-6的表達(dá)均無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1.潑尼松可改善MRL/lpr小鼠的臨床表現(xiàn),降低尿蛋白和自身抗體水平以及脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。
　　2.潑尼松改善MRL/lpr小鼠臨床表現(xiàn)的作用可能與抑制IL-21產(chǎn)生、下調(diào)脾臟Blimp-1和Bcl-6表達(dá)、抑制漿細(xì)胞分化有關(guān)。