褪黑素對(duì)胃腺癌SGC7901細(xì)胞的作用及其部分機(jī)制.pdf

1、研究背景：胃癌(Gastriccarcinoma)是嚴(yán)重危害人類健康的最常見的惡性腫瘤之一。2005年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,全球胃癌發(fā)病率10~150/10萬,每年新發(fā)病例約93.4萬人,位居所有惡性腫瘤的第4位;每年死亡約70萬人,死亡率位列所有腫瘤的第2位(占10.4％)。尤其應(yīng)引起注意的是進(jìn)展期胃癌的患者占有相當(dāng)大的比例。即便是早期診斷的患者,雖有超過50%的患者接受了手術(shù)治療,但這些患者當(dāng)中的60%仍然會(huì)出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。侵襲和

2、轉(zhuǎn)移是包括胃癌在內(nèi)的惡性腫瘤的重要特征,也是惡性腫瘤預(yù)后差的主要原因之一。彌散性或者進(jìn)展期胃癌的患者一般情況都比較差,且對(duì)傳統(tǒng)的化療不敏感,所以在化療基礎(chǔ)上的綜合治療也越來越多的用于臨床,可以改善患者的預(yù)后,明顯提高患者的生存率和生活質(zhì)量。
　　褪黑素(Melatonin,Mel)是主要由松果腺分泌的一種吲哚類生物活性物質(zhì),在體內(nèi)有廣泛的生物學(xué)功能,如調(diào)節(jié)生物節(jié)律、抗氧化、提高免疫力、抗衰老、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜等。近年來研究還發(fā)現(xiàn),Mel有

3、明顯的預(yù)防、治療腫瘤和延緩腫瘤進(jìn)展的作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)均表明,Mel能有效抑制乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤,降低腫瘤風(fēng)險(xiǎn)和提高腫瘤病人的生活質(zhì)量。惡性腫瘤化療時(shí)聯(lián)合使用Mel可以增強(qiáng)傳統(tǒng)化療藥物的療效,降低其不良反應(yīng),改善癌癥患者預(yù)后,是比較有效的臨床綜合治療的常用藥物。國(guó)外多篇文獻(xiàn)均報(bào)道了臨床上使用Mel聯(lián)合治療可以明顯改善胃癌患者的預(yù)后,但是其抗胃癌作用的作用機(jī)制尚不明確。本課題探討Mel對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞的作用及

4、其可能的分子機(jī)制,為Mel更好的用于胃癌的臨床治療奠定理論基礎(chǔ)。
　　目的：研究Mel對(duì)胃腺癌細(xì)胞系SGC7901的增殖、凋亡以及侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響,并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：用Mel處理胃腺癌細(xì)胞SGC7901,用Hoechst染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Mel對(duì)SGC7901細(xì)胞凋亡的影響,用Westernblot的方法檢測(cè)Mel對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xs/l、Bcl-2、Bax、Bak、Caspase3、Cas

5、pase9、NF-κB等表達(dá)的影響。MTT法檢測(cè)Mel對(duì)SGC7901細(xì)胞的增殖抑制作用,劃痕實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Mel對(duì)SGC7901細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移以及克隆形成能力的影響。免疫組化檢測(cè)endocan在胃癌組織中的表達(dá)情況;Westernblot檢測(cè)Mel處理對(duì)SGC7901細(xì)胞中與腫瘤細(xì)胞分化、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)蛋白endocan、GRIM-19、VEGF、緊密連接相關(guān)蛋白o(hù)ccludin、Mel受體1、G蛋白G

6、αs、Gαi-1和Gαi-2表達(dá)以及ERK和p38磷酸化水平的影響。用免疫熒光方法分析Mel處理對(duì)SGC7901細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白o(hù)ccludin細(xì)胞定位的影響。
　　結(jié)果：Mel可誘導(dǎo)SGC7901細(xì)胞的凋亡,且可下調(diào)凋亡抑制蛋白Bcl-xs/l和Bcl-2的表達(dá),上調(diào)促凋亡蛋白Bax、Bak的表達(dá),對(duì)酶原形式的Caspase3和Caspase9的表達(dá)沒有影響,降低NF-κB的表達(dá)。Mel可以明顯抑制細(xì)胞增殖以及侵襲轉(zhuǎn)移能力

7、,并且能夠抑制VEGF表達(dá),上調(diào)GRIM-19和endocan的表達(dá)。Mel能夠促進(jìn)SGC7901細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白o(hù)ccludin在細(xì)胞膜的定位,從而促進(jìn)緊密連接的形成。Mel處理的SGC7901細(xì)胞中Mel1型受體的表達(dá)增加,Gαs的表達(dá)沒有明顯改變,Gαi-1和Gαi-2的表達(dá)下降。Mel可以降低SGC7901細(xì)胞中ERK和p38的磷酸化水平而抑制ERK/p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。
　　結(jié)論：Mel通過抑制SGC