茯苓固態(tài)發(fā)酵動態(tài)變化及發(fā)酵產(chǎn)物提取液功效初步研究.pdf

1、茯苓（Poria cocos(Schw.)Wolf）作為我國傳統(tǒng)的食藥兼用真菌之一，具有健脾、安神、降糖、抑菌、抗癌等功效，在國內(nèi)外享有盛名。本研究采用食藥用真菌茯苓菌對小麥進行固態(tài)發(fā)酵，分析茯苓菌固態(tài)發(fā)酵過程中關(guān)鍵酶活力的變化及基質(zhì)營養(yǎng)成分的變化規(guī)律；以茯苓固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物為原料制備提取液，探究發(fā)酵產(chǎn)物提取液對大鼠肝臟及抗氧化能力的影響；通過PCR-DGGE技術(shù)和傳統(tǒng)分離培養(yǎng)的方法探究發(fā)酵產(chǎn)物提取液對大鼠腸道菌群的影響，并驗證提取液對雙歧

2、桿菌和乳桿菌的體外增殖效果，以期為茯苓固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)品開發(fā)提供理論依據(jù)。本研究得到如下結(jié)果：
　　1.茯苓菌固態(tài)發(fā)酵過程中關(guān)鍵酶活力和產(chǎn)物營養(yǎng)成分變化規(guī)律
　　采用茯苓菌對小麥進行固態(tài)發(fā)酵，探究在26℃條件下，茯苓菌生長過程中關(guān)鍵酶活力的變化情況及產(chǎn)物營養(yǎng)成分的變化情況，結(jié)果表明：在茯苓固態(tài)發(fā)酵的過程中，淀粉酶活力隨培養(yǎng)時間延長不斷升高，20 d時達494.2 U·mL-1，隨后基本保持穩(wěn)定；木聚糖酶活力隨培養(yǎng)時間延長不斷

3、提升，20 d達1073.2 U·mL-1，隨后略有下降；纖維素酶活力隨培養(yǎng)時間延長不斷提升，40d達1280.5U·mL-1。發(fā)酵產(chǎn)物的總糖含量明顯下降，25 d時下降了45.2％，之后保持穩(wěn)定；多糖含量先上升后下降，在25 d時達到最高，占產(chǎn)物干重26.83%；；還原糖含量隨著培養(yǎng)時間的延長逐漸提高，培養(yǎng)至第35 d達到最高，占產(chǎn)物干重的27.40%；隨著培養(yǎng)時間的延長，總?cè)婆c水溶性三萜的含量逐漸提高，在培養(yǎng)至25 d達到最高值，

4、分別為1.6 mg/g與0.12 mg/g。發(fā)酵25 d后，發(fā)酵產(chǎn)物中的營養(yǎng)成分含量基本保持相對穩(wěn)定，說明茯苓固態(tài)發(fā)酵的周期為25 d左右。
　　采用SPME-GC-MS聯(lián)用方法，對小麥與發(fā)酵25 d產(chǎn)物的揮發(fā)性成分比較發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵產(chǎn)物中的揮發(fā)成分的種類有所增加，發(fā)酵過程產(chǎn)生了酮類、含氮雜環(huán)類化合物等。且產(chǎn)物中醛類和烯烴類的相對含量有所增加，烷烴類相對含量有所下降，經(jīng)茯苓發(fā)酵所得產(chǎn)物的揮發(fā)性成分較小麥而言更加豐富。
　　2.茯

5、苓固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物提取液對大鼠肝功能和抗氧化性的影響
　　以茯苓固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物為原料制備提取液（FPE），探究FPE對大鼠肝功能和抗氧化性的影響。結(jié)果表明：飼喂4周后，試驗組（FPE組）與對照組（生理鹽水組）大鼠的體質(zhì)量分別為：320.31±5.89 g和320.65±10.13g，并無顯著差異，說明 FPE不會對大鼠的進食產(chǎn)生影響。試驗組與對照組的血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、白蛋白（ALB

6、）的變化無顯著性差異（P>0.05），提示FPE不會損害大鼠的肝功能；試驗組與對照組大鼠血清中的總抗氧化能力（TAS）分別為2.0±0.22 mM和1.4±0.14 mM，差異顯著（P<0.05），且試驗組大鼠血清中超氧化物歧化酶（T-SOD）活性為129.98±4.60 U/mL，相比于對照組（111.55±5.16 U/mL）提升極其顯著（P<0.01），說明飼喂FPE可以提升大鼠血清的抗氧化能力。
　　3.茯苓固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物提

7、取液對大鼠腸道菌群的影響
　　通過傳統(tǒng)分離培養(yǎng)和 PCR-DGGE方法，研究 FPE對大鼠腸道菌群的影響。對飼喂前后大鼠糞便中的乳桿菌、雙歧桿菌、腸桿菌、腸球菌的計數(shù)結(jié)果表明，與對照組相比，試驗組大鼠腸道內(nèi)乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量顯著提升(P<0.05)。取大鼠腸容物進行 PCR-DGGE實驗，發(fā)現(xiàn)對照組（生理鹽水組）與試驗組（FPE組）大鼠腸道菌群的優(yōu)勢條帶數(shù)差異不大，分別為18條和16條。選取其中變化較大的9條條帶進行回收、克隆、

8、測序，經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育分析，發(fā)現(xiàn)這9條條帶分屬于擬桿菌門（Bacteroidetes），變形菌門（Proteobacteria），厚壁菌門（Firmicutes），茯苓固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物提取液可以通過促進 Lactobacillus johnsonii，Lactobacillus reuteri等益生菌的生長，減少Clostridium bifermentans等致病菌在腸道中的數(shù)量，起到調(diào)節(jié)大鼠腸道菌群的作用。
　　4.茯苓固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物提取

9、液對雙歧桿菌和乳桿菌增殖效果體外驗證實驗
　　通過測定菌體培養(yǎng)液OD600的方法，進行茯苓發(fā)酵產(chǎn)物提取液對乳桿菌和雙歧桿菌的增殖效果進行體外驗證實驗，結(jié)果表明：與異麥芽低聚糖（IMO）和低聚果糖（FOS）相比，添加了 FPE的培養(yǎng)基可以更好的促進雙歧桿菌的生長（P<0.01），說明FPE可以作為一種雙歧因子，促進雙歧桿菌的增殖。培養(yǎng)基中FPE的濃度為2.5%~5%時對雙歧桿菌和乳桿菌的增殖效果最好。在添加了 FPE的培養(yǎng)基中生長的