樟芝發(fā)酵及其代謝產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、樟芝(Antrodia Cinnamomea),又名牛樟芝、牛樟菇。樟芝發(fā)酵產(chǎn)品中含有多種生理活性物質(zhì),具有保護(hù)肝臟、抗炎、抗氧化、解毒、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等功效。三萜系化合物是樟芝中的主要活性成分,三萜類化合物種類繁多。本論文以總?cè)苹衔餅橹饕繕?biāo)產(chǎn)物,對(duì)樟芝液態(tài)和固態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化,并對(duì)這兩種生產(chǎn)方式代謝產(chǎn)物進(jìn)行了比較。
　　 在前人的基礎(chǔ)上改進(jìn)了檢測(cè)樟芝三萜類化合物含量的香草醛-高氯酸比色法。確定了最佳提取條件為:1.

2、0g發(fā)酵樣品,加入95％乙醇溶液50mL,50℃恒溫水浴鍋中浸泡1.5h;最佳檢測(cè)條件為:取0.1mL過濾液,加入0.2mL新配的5％香草醛.冰醋酸溶液和0.5mL的高氯酸,放入60℃恒溫水浴中加熱20min后,用流動(dòng)冷卻水冷卻至室溫,加入5.OmL冰醋酸,混勻,于波長(zhǎng)550nm處檢測(cè)OD值。與其他檢測(cè)方法相比,此顯色反應(yīng)靈敏度較高,重現(xiàn)性和穩(wěn)定性也較好。
　　 以樟芝菌體量和樟芝三萜系化合物為目標(biāo)產(chǎn)物,首先通過單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了

3、樟芝搖瓶培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。優(yōu)化后的樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖60g/L,大豆水解液40mL/L,玉米漿含量20mL/L,硫酸鎂和磷酸氫二鈉各0.50g/L。培養(yǎng)條件為:裝料量120mL/500mL瓶,接種量為裝料量的12.5％(v/v),培養(yǎng)溫度28℃,搖床轉(zhuǎn)速120r/min,pH5.5。
　　 在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)樟芝液態(tài)發(fā)酵菌體量和三萜類化合物含量影響較為顯著的因素進(jìn)行均勻設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。得到最優(yōu)液態(tài)發(fā)酵條

4、件為:葡萄糖43.6g/L,大豆水解液75.7mL/L,玉米漿用量40mL/L,硫酸鎂和磷酸氫二鈉各0.50g/L。培養(yǎng)條件為:裝料量120mL/500mL,接種量為裝料量的12.5％(v/v),培養(yǎng)溫度28℃,搖床轉(zhuǎn)速120r/min,初始pH值4.75。搖瓶培養(yǎng)7天后的樟芝菌體量和三萜化合物含量分別為12.05g/L和45.04mg/g,是優(yōu)化前0.73g/L菌體量和20.9mg/g三萜類化合物含量的16.5倍和2.16倍,也是文獻(xiàn)

5、報(bào)道的樟芝液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中三萜類化合物含量的2.7倍。
　　 以樟芝三萜系化合物作為目標(biāo)產(chǎn)物,首先通過單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)樟芝固態(tài)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。優(yōu)化后的樟芝固態(tài)發(fā)酵條件為(每瓶):小米105g,添加0.3g NH4Cl,加水量78mL,接種量45mL,培養(yǎng)溫度28℃。
　　 在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)樟芝三萜類化合物含量影響較為顯著的因素進(jìn)行了均勻設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。得到最優(yōu)固態(tài)發(fā)酵條件為(每瓶):小米120g,加

6、水量48mL,接種量55mL,NH4Cl加量0.22g,培養(yǎng)溫度28℃。在此培養(yǎng)條件下,樟芝三萜系化合物含量達(dá)到82.44mg/g(干基),是未優(yōu)化前的1.56倍;固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中三萜系化合物的含量是文獻(xiàn)報(bào)道的樟芝液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中三萜類化合物含量的5倍,也是本實(shí)驗(yàn)樟芝液態(tài)三萜化合物含量的1.83倍。
　　 比較了樟芝液態(tài)和固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物活性物質(zhì)成分及含量,可以看出樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的總?cè)苹衔锖繛?4.44mg/g,是液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中