極端環(huán)境土壤中拮抗性鏈霉菌的分離篩選及其代謝產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、鏈霉菌是一類廣泛存在于自然界中的革蘭氏陽性絲狀細(xì)菌，能產(chǎn)生酶、抗腫瘤制劑、免疫抑制劑、維生素和抗生素等代謝產(chǎn)物，尤其可以產(chǎn)生各種的抗生素，如放線菌素、紅霉素、阿洛氨菌素及尼克霉素等。當(dāng)今，由于抗生素濫用導(dǎo)致的病原菌抗生素耐藥性，迫切要求我們開發(fā)新的抗生素。因而從極端環(huán)境或一些未開發(fā)過的環(huán)境中分離鏈霉菌，是獲得新抗生素的重要途徑，同時也是鏈霉菌研究的一個熱點(diǎn)。本研究以采自河西走廊中部荒漠、青藏高原的扎加藏布、格爾木、措那湖和烏麗等原生態(tài)區(qū)

2、域中的土壤為樣品，對其中的鏈霉菌進(jìn)行了分離培養(yǎng)，運(yùn)用16S rRNA基因序列鑒定及分析，進(jìn)行抗菌活性測定，并對分離的1株菌5-1-3進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵及產(chǎn)物與結(jié)構(gòu)鑒定，取得如下結(jié)果。
　　1、從6個樣點(diǎn)的土壤樣品中共分離到了164鏈霉菌。其中，運(yùn)用傳統(tǒng)鏈霉菌分離方法，從河西走廊荒漠蘆葦根際土壤中分離到了113株鏈霉菌相似菌株，非根際土壤中分離到了30株。表明河西走廊荒漠蘆葦根際及非根際土壤樣品中存在著大量的鏈霉菌資源，涵蓋了鏈霉菌屬的白

3、孢類群、燼灰類群、灰紅紫類群、粉紅孢類群、球孢類群、黃色類群、吸水類群、青色類群、淡紫灰類群等9個類群。其中，根際土壤中的鏈霉菌以白孢類群、淡紫灰類群、黃色類群、灰紅紫類群為主，而非根際土壤中的則以白孢類群和黃色類群為主。采用E.coli BTH101拮抗性菌株篩選方法，從青藏高原土壤中共分離到了21株E.coli BTH101拮抗鏈霉菌相似菌株，以黃色類群、灰紅紫類群和青色類群為主，并且大部分的菌株在后期能產(chǎn)生不同顏色的可溶性色素。<

4、br>　　2、選擇其中的52株鏈霉菌進(jìn)行16S rRNA基因序列PCR擴(kuò)增及測序，測序結(jié)果經(jīng)NCBI中的Blast比對，其中50株序列與鏈霉菌相似性均在99～100％之間，表明其全部為鏈霉菌。16S rRNA基因序列分析表明河西走廊荒漠蘆葦根際及非根際土壤中存在著鏈霉菌，并以淺天藍(lán)鏈霉菌（S.coerulescens）、變異鏈霉菌（S.variabilis）和天藍(lán)褐鏈霉菌（S.coeruleofuscus）為優(yōu)勢菌群。青藏高原土壤中的1

5、0株菌分別屬于鏈霉菌的不同種。
　　3、以細(xì)菌枯草芽孢桿菌（B.subtilis）、金黃色葡萄球菌（S.aureus）、大腸桿菌（E.coli）和E.coli BTH101，真菌辣椒晚疫病菌（P.capsici）、甘藍(lán)枯萎菌（F.oxysporum sp.conglutinans）和番茄灰霉菌（B.cinerea）為測試菌株，共從這6個樣點(diǎn)中分離到了134株抗細(xì)菌鏈霉菌，33株抗真菌鏈霉菌株。從河西走廊荒漠蘆葦根際及非根際土壤中分

6、離了112株拮抗鏈霉菌，其中98株對B.subtilis、S.aureus和E.coli有拮抗性，僅8株對E.coli BTH101具有拮抗性，33株對P.capsici、F.oxysporum和B. cinerea有拮抗性。從青藏高原土壤樣品中共分離篩選出了21株對E.coli BTH101有拮抗作用的鏈霉菌。總體結(jié)果表明，在該研究的極端環(huán)境土壤中具有較豐富的拮抗性鏈霉菌資源，具有進(jìn)一步挖掘的價值。
　　4、對分離純化的抗 E.

7、coli BTH101菌株進(jìn)行了抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）試驗(yàn)，從中分離出菌株5-1-3和EJZB3-1具有較強(qiáng)的MRSA抗性。對菌株5-1-3進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取、多次柱層析及高效液相色譜分離分析，從發(fā)酵產(chǎn)物中分離到多種次生代謝產(chǎn)物，對其中1種具有較強(qiáng)S.aureus、MRSA抗生作用的淡黃色化合物進(jìn)行了核磁分析，確定其為棘霉素，產(chǎn)率為20mg/L。其它的代謝產(chǎn)物正在進(jìn)行進(jìn)一步分析，有望獲