土壤微生物的篩選及其次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、微生物來源的先導(dǎo)化合物因其來源豐富、結(jié)構(gòu)獨(dú)特等優(yōu)勢(shì)在藥物開發(fā)中占有不可估量的作用。然而，近年來隨著抗生素在臨床以及其他領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，細(xì)菌耐藥性日益嚴(yán)峻。但近50年來，僅有利奈唑烷和達(dá)托霉素兩種新型結(jié)構(gòu)的抗生素投入到臨床實(shí)踐中來，這在很大程度上提示了人類對(duì)新抗生素的研發(fā)迫在眉睫。
　　基于上述背景，本論文以土壤為材料，從中篩選具有抑菌活性的微生物，然后進(jìn)行發(fā)酵、分離純化得到目標(biāo)化合物，對(duì)其進(jìn)行抗菌活性研究，最后進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)鑒定及

2、產(chǎn)生菌的菌種鑒定。
　　本研究以采自國內(nèi)不同地區(qū)的5份土壤作為分離對(duì)象，共分離到197株菌，其中細(xì)菌96株，真菌43株，放線菌58株。對(duì)分離到的菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，然后采用杯碟法，對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抗菌活性測(cè)定得到21株具有抑菌活性的菌株。結(jié)合抑菌活性及HPLC圖譜，確定SIPI-2014406為主要研究菌株。
　　采用大孔吸附層析、反相C18層析對(duì)SIPI-2014406菌株的發(fā)酵液進(jìn)行純化，得到化合物018和009?；衔?1

3、8的純度98.3％，化合物009純度99.6%。
　　抑菌活性測(cè)定表明：化合物009與發(fā)酵液抑菌譜相似，為廣譜抗菌作用。但是化合物018的抑菌譜有所不同，對(duì)陰性菌抑菌作用更為敏感。采用常量肉湯微量測(cè)定化合物018、009對(duì)敏感菌株的MIC，化合物009對(duì)各種受測(cè)菌株抑制作用微弱；化合物018對(duì)陰性菌有明顯抑制作用，對(duì)陽性菌及真菌作用微弱。
　　氨基酸測(cè)定表明化合物009、018均含有氨基酸：D-Ser、L-Thr、L-Asp

4、、D-Asp、L-Glu、L-Pro、D-Tyr。綜合氨基酸組成、質(zhì)譜、二級(jí)質(zhì)譜和核磁共振分析及相關(guān)參考文獻(xiàn)推斷化合物009為normal-C14bacillomycin D，分子式為C48H74N10O15，并確定其結(jié)構(gòu)式；化合物018分子式為 C50H78N10O15，結(jié)構(gòu)式有待進(jìn)一步研究。
　　基于16S rDNA序列的系統(tǒng)發(fā)育分析表明：該菌株SIPI-2014406與一株Bacillus sp. DOA6（芽孢桿菌DOA6