土壤放線菌的篩選、鑒定及其活性代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、放線菌由于其產(chǎn)生抗生素、酶及其抑制劑等有用生物活性物質(zhì),具有巨大經(jīng)濟(jì)價(jià)值,至今發(fā)現(xiàn)的兩萬(wàn)種生物活性物質(zhì)中,約70％是由放線菌產(chǎn)生的。而土壤又是放線菌含量最豐富的地方,因此開(kāi)發(fā)土壤放線菌具有十分重要的意義。本研究旨在土壤中分離出對(duì)多種植物病原真菌具有強(qiáng)烈拮抗作用的放線菌,對(duì)菌株進(jìn)行鑒定,并對(duì)其抑菌活性物質(zhì)進(jìn)行分離,尋找新型農(nóng)用抗生素的產(chǎn)生菌來(lái)源,具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　 (1)放線菌的分離。對(duì)來(lái)自黑龍江省、湖北省、山東省、貴州省、

2、河北省五個(gè)省份的九份土樣進(jìn)行自然干燥等預(yù)處理后,采用選擇性分離培養(yǎng)基腐殖酸培養(yǎng)基加50μg/mL的重鉻酸鉀進(jìn)行放線菌的選擇性分離。共分離得到101株放線菌。
　　 (2)高活性菌株的篩選。采用管碟法測(cè)定了101株放線菌發(fā)酵液對(duì)細(xì)菌的抑菌活性,其中有31株放線菌對(duì)枯草芽孢桿菌和藤黃微球菌的抑菌圈直徑≥15mm,其中W2、W13、B5、Q5、Q10這5株放線菌的抑菌圈直徑都在20mm以上。
　　 (3)放線菌的分類(lèi)學(xué)研究。結(jié)

3、合經(jīng)典分類(lèi)和分子生物學(xué)中16SrRNA分類(lèi),對(duì)W2、W13、Q1、Q2、Q7這5株放線菌的分類(lèi)研究表明:其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征均與鏈霉菌屬一致;其中W2號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomyces neyagawaensis ATCC 27449的相似性達(dá)到99％;Q1號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomyces corchorusii 088-68-1的相似性達(dá)到99％;Q2號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomyces lavendu

4、lae ZGO429的相似性達(dá)到99％;Q7號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomycessp.VTTE-99-1333(B306)的相似性達(dá)到99％;W13號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomyces thermocarboxydus AT37的相似性達(dá)到99％。進(jìn)一步確定這5株放線菌均屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)。
　　 (4)發(fā)酵粗提物對(duì)真菌的抑制研究。對(duì)細(xì)菌有較好抑菌活性的W2、W13、B5、Q5、Q10這5株放線菌發(fā)

5、酵粗提物,進(jìn)行了對(duì)9種致病真菌的抑菌活性研究,結(jié)果表明,其發(fā)酵粗提物至少對(duì)4種真菌有抑菌作用,對(duì)6種以上真菌有抑制作用的菌株有2株,分別為W2和Q5,其中W2菌株對(duì)7種真菌都有抑菌作用,并且抑制率都在50％以上。
　　 (5)發(fā)酵粗提物的分離。將這5株放線菌的發(fā)酵粗提物進(jìn)行了分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果顯示,從W2中分離出了2種化合物,其中化合物7-prenylindole具有抑制真菌的作用,化合物borrelidin具有抗癌,抑

6、菌,除草活性等多種用途;從W13中分離出了1種新的化合物;從B5中分離出了2種化合物conglobatin和armstrienB;從Q5中分離出1種化合物;從Q10中分離出2種化合物
　　 (6)化合物的活性驗(yàn)證。進(jìn)行了化合物7-prenylindole和borrelidin的抑真菌活性測(cè)定,結(jié)果表明:化合物7-prenylindole在濃度為100μg/ml,時(shí)。對(duì)6種致病真菌都有抑制活性。Borrelidin在濃度為100μ