海洋放線菌的分離、活性篩選和次級代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、天然產(chǎn)物是藥物的重要來源。海洋具有高壓、低溫、高鹽度等極端環(huán)境，生活在其中的海洋放線菌已發(fā)展出獨特的代謝方式，這不僅確保這類微生物能夠在極端環(huán)境中生存，也造就了其產(chǎn)生新穎的次級代謝產(chǎn)物的能力。
　　本論文采用分散差速離心法與4種選擇性分離培養(yǎng)基，從15份臺灣海峽海泥樣品中分離到海洋放線菌216株，其中脯氨酸-MOPS培養(yǎng)基與聚乳酸培養(yǎng)基對于海洋放線菌有良好的分離效果。
　　采用固體發(fā)酵與液體發(fā)酵方式，對216株海洋放線菌進行

2、小量發(fā)酵，獲得432份發(fā)酵初提物。以6株細菌和2株真菌作為指示菌，對432份發(fā)酵初提物進行抗菌活性篩選，有164株(77％)海洋放線菌對8種指示菌中的一種或幾種具有抑制作用，有75株(35.2％)具有較強抑制作用。
　　采用MTT法對216株海洋放線菌進行腫瘤細胞毒活性篩選，結(jié)果表明，初提物樣品濃度為50μg/mL時，有36株(16.6％)對HeLa細胞或HepG2細胞有抑制作用（抑制率≥50％）;樣品濃度為100μg/mL時，有

3、65株(30.5％)對HeLa細胞或HepG2細胞有抑制作用。
　　選取89株海洋放線菌進行16S rRNA基因序列分析，結(jié)果表明，89株海洋放線菌歸屬于15個屬，分別為鏈霉菌屬(Streptomyces)、小單孢菌屬(Micromonospora)、諾卡氏菌屬(Nocardia)、疣孢菌屬(Verrucosispora)、馬杜拉放線菌屬(Actinomadura)、野野村氏菌屬(Nonomuraea)、擬諾卡氏菌屬(Nocard

4、iopsis)、假諾卡氏菌(Pseudonocardia)、糖單孢菌屬Saccharomonospora)、韓國生工菌屬(Kribbella)、冢村氏菌屬(Tsukamurella)、普氏菌屬(Prauseria)、鏈孢囊菌屬(Streptosporangium)、珊瑚放線菌屬(Actinocorallia)和鏈單孢菌屬(Streptomonospora)。
　　選取3株海洋稀有放線菌進行次級代謝產(chǎn)物的研究，共分離到17個化合物，

5、其中有6個為新化合物。
　　從菌株H-88(Kribbella jejuensis)中分離到4個化合物，分別為1-甲基-2-喹諾酮(K-3)、吡嗪類化合物(K-6)和2個環(huán)二肽類化合物(K-8和K-9)。
　　從菌株5-58(Nonomuraea ferruginea)分離到6個化合物，分別為3個吲哚類化合物(m-2、m-8和m-20)、2個二糖類化合物(m-25和m-26)和呋喃類化合物(m-30)，其中m-25、m-26

6、和m-30為新化合物。
　　從菌株H-100(Actinomadura cremea)分離到7個化合物，分別為3個萜類化合物(a-1、a-2-1和a-2-2)、Glucopyranoside(a-28)、呋喃類化合物(a-33)、二糖類化合物(a-35)和苯-y-吡喃酮衍生物(a-36)，其中a-1、a-2-2和a-35為新化合物。
　　對17個化合物進行抗菌活性（濾紙片法）、腫瘤細胞毒活性（MTT法）測定。在1μg/mL和