土壤放線菌的分離、鑒定及其活性化合物的研究.pdf

1、放線菌由于其產(chǎn)生抗生素、酶及其抑制劑等有用生物活性物質(zhì)，具有巨大經(jīng)濟(jì)價(jià)值，至今發(fā)現(xiàn)的兩萬(wàn)種生物活性物質(zhì)中，約70％是由放線菌產(chǎn)生的。而土壤又是放線菌含量最豐富的地方，因此開發(fā)土壤放線菌具有十分重要的意義。為了從土壤中分離出放線菌；以及從這些菌株的發(fā)酵物中分離出新的微生物農(nóng)藥。本研究采用了選擇性培養(yǎng)基結(jié)合三重抗生素抗性篩選法對(duì)土壤放線菌進(jìn)行篩選，對(duì)篩選的菌株進(jìn)行了其活性化合物的研究，具體研究?jī)?nèi)容如下：
　　 （1）放線菌的分離。對(duì)

2、來(lái)自四川省達(dá)州市、湖北省武漢市、山東省臨沂市、遼寧省海城市、黑龍江省哈爾濱市等五個(gè)地區(qū)的土樣進(jìn)行自然干燥等預(yù)處理后，采用選擇性分離培養(yǎng)基腐殖酸培養(yǎng)基加20μg/mL的萘啶酮酸進(jìn)行放線菌的選擇性分離。共分離得到54株放線菌。
　　 （2）高活性菌株的篩選。采用鏈霉素（Streptomycin）、慶大霉素（Gentamicin）及利福平（Rifampicin）三重抗生素抗性篩選法對(duì)所得到的放線菌進(jìn)行進(jìn)一步篩選。最終得到4株活性很高的

3、放線菌，其分別是10號(hào)、49號(hào)、50號(hào)和52號(hào)放線菌，并對(duì)其進(jìn)行了進(jìn)一步研究。
　　 （3）發(fā)酵粗提物對(duì)細(xì)菌和真菌的抑制研究。將4株放線菌的發(fā)酵粗提物，進(jìn)行了對(duì)2種細(xì)菌及9種致病真菌的抑菌活性研究，結(jié)果表明，其發(fā)酵粗提物對(duì)細(xì)菌的抑菌圈均達(dá)到20mm以上，對(duì)9種真菌也表現(xiàn)出了不同程度的抑制活性，有的甚至達(dá)到了95％以上。
　　 （4）發(fā)酵粗提物的除草活性研究。將這4株放線菌的發(fā)酵粗提物進(jìn)行了2種除草劑靶標(biāo)酶的篩選和除草活性

4、的測(cè)定。結(jié)果顯示10號(hào)菌株的發(fā)酵粗提物能抑制天冬酰胺合成酶，同時(shí)對(duì)稗草和苘麻均有很強(qiáng)的抑制作用。
　　 （5）發(fā)酵粗提物的溫度穩(wěn)定性研究。經(jīng)過(guò)對(duì)這4株放線菌的發(fā)酵粗提物的熱穩(wěn)定性研究，得出的結(jié)果是10號(hào)、50號(hào)和52號(hào)放線菌的發(fā)酵粗提物對(duì)溫度的穩(wěn)定性較好，當(dāng)溫度達(dá)到90℃時(shí)，還具有很強(qiáng)的抑菌活性；49號(hào)菌株的發(fā)酵粗提物對(duì)溫度的穩(wěn)定性較弱，當(dāng)溫度達(dá)到30℃，其抑菌活性就完全喪失了。
　　 （6）放線菌的分類學(xué)研究。結(jié)合經(jīng)典

5、分類和分子生物學(xué)中16SrDNA分類，對(duì)這4株放線菌的分類研究表明：其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征均與鏈霉菌屬一致：其其中10號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomyceslavendulae的相似性達(dá)到99％；49號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomycesviolaceolatus的相似性達(dá)到99％；50號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomycesolivaceus的相似性達(dá)到99％；52號(hào)放線菌同鏈霉菌Streptomycespactums

6、train173848的相似性達(dá)到100％。進(jìn)一步確定這4株放線菌均屬于鏈霉菌屬（Streptomyces）。
　　 （7）發(fā)酵粗提物的分離。將這4株放線菌的發(fā)酵粗提物進(jìn)行了分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果顯示，其中從10號(hào)菌株中分離出了6種化合物；49號(hào)菌株中分離出了化合物fogacin，50號(hào)菌株中分離出了具有抗癌、抑菌、除草等多種用途的活性化合物borrelidin，從52號(hào)菌株中分離出了2種化合物。
　　 （8）化合物