拮抗冬棗黑斑病菌鏈霉菌的獲得及其產(chǎn)物活性研究.pdf

1、冬棗黑斑病是由細極鏈格孢(Alternaria tenuissima)引起的一種真菌性病害,嚴重制約著冬棗的產(chǎn)業(yè)發(fā)展。本文以沾化縣冬棗栽培區(qū)的根際土壤作為菌種的獲得來源,采用瓊脂塊法篩選出一株對冬棗黑斑病病原有著很好的抑菌效果的放線菌,并進行了放線菌分類鑒定,旨在為冬棗黑斑病生防藥物的開發(fā)提供新的菌種。研究結(jié)果如下:
　　1、對山東沾化縣冬棗栽培區(qū)不同質(zhì)地、不同種植年限土壤微生物數(shù)量和養(yǎng)分狀況進行研究發(fā)現(xiàn),沾化縣冬棗栽培區(qū)根際土壤

2、微生物總數(shù)明顯高于根外(非根際),呈現(xiàn)出明顯的根際效應(yīng)。并且隨著冬棗棗樹種植年限增加,微生物總數(shù)呈現(xiàn)增加趨勢。土壤中細菌數(shù)量最多,其次為放線菌和真菌,并且鏈霉菌種類繁多。該地區(qū)砂質(zhì)土壤中微生物數(shù)量高于粘質(zhì)土壤,因為砂質(zhì)土壤通風性較好,有利于微生物生長。
　　2、本實驗共分離到520株放線菌。用瓊脂塊法進行初步篩選,得到8株具有很好的廣譜抑菌性的放線菌,通過對發(fā)酵液進行抑菌活性測定,獲得了一株既具有廣譜抑菌性并且對沾化冬棗黑斑病病原

3、有顯著地抑菌性的放線菌,命名為K14,瓊脂塊法測得的對冬棗黑斑病致病菌的平均抑菌圈直徑達到30 mm。
　　3、采用多相分類技術(shù)對拮抗放線菌K14進行了分類鑒定。將 K14初步鑒定為白黃鏈霉菌(Streptomyces alboflavus)。
　　4、采用單因素和正交試驗相結(jié)合,對放線菌K14的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵工藝條件進行了優(yōu)化。得出K14菌株的發(fā)酵最適培養(yǎng)基為:葡萄糖為3％磷酸氫二鈉為0.05％,氯化鈉為0.05％,硫酸

4、鎂為0.1％,玉米粉為2％,蛋白胨為0.1％,黃豆粉為4％,。最佳發(fā)酵工藝條件為:搖瓶裝液量為100mL,發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH7.5,培養(yǎng)溫度28℃,搖床轉(zhuǎn)速180r/min,發(fā)酵時間為144h。
　　5、對放線菌K14發(fā)酵液中的抑菌活性物質(zhì)的穩(wěn)定性進行研究。試驗表明,菌株具有良好的遺傳穩(wěn)定性,傳代多次后仍然具有很高的抑菌活性。其活性產(chǎn)物具有較好的耐熱性和耐堿性,但是在酸性條件和紫外光照的環(huán)境下抑菌活性顯著降低。
　　6、對發(fā)