RSOD基因的合成及其蘋果的遺傳轉化研究.pdf

1、植物分子育種可以通過提高植物的抗病、蟲、雜草能力及非生物脅迫抗性來提高植物的產量。近年來，利用植物作為生物反應器生產蛋白質在工業(yè)和臨床應用上越來越受到重視。通過這種方式已經生產了多種重組酶類和抗體。僅從經濟角度來考慮，植物生物反應器與發(fā)酵相比較而言生產成本要低的多。植物生長發(fā)育僅需要太陽能、CO<,2>和一些無機肥料，而發(fā)酵卻需要昂貴的儀器設備、電能和培養(yǎng)基。目前，植物生物反應器已經從理論研究轉向商業(yè)探索，并且其表達水平已經達到了和細菌

2、、酵母及動物細胞培養(yǎng)相提并論的程度。 人的SOD作為一種重要的醫(yī)藥和化妝品原料，有著重要的商業(yè)價值。本論文通過對人Cu／Zn-SOD基因的改造(改造后命名為RSOD)，旨在提高該基因在轉基因植物中的表達量和穩(wěn)定性。該基因的改造包括：使用植物偏愛密碼子，在其3端引入一段內質網滯留序列(KDEL)，在5端引入煙草分泌信號肽序列(PR-S)。本研究通過PTDS基因合成技術完成了人Cu／Zn-SOD基因的拼接，產物克隆及全長基因的核苷酸

3、全序列測定。然后構建了兩個分別由CaMV35S啟動子和番茄果實特異性PG基因啟動子控制RSOD基因表達的植物雙元載體。最后通過農桿菌介導法，用CaMV35S啟動子控制RSOD基因表達的植物雙元載體轉化擬南芥，用番茄果實特異性PG基因果實特異性啟動子控制RSOD基因表達的植物雙元載體轉化蘋果。 利用農桿菌蘸花法共獲得了21株擬南芥陽性植株，GUS染色和PCR鑒定結果初步表明，外源基因已經整合入轉基因擬南芥基因組中。RT-PCR分析