蘋果遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的優(yōu)化與APX基因的瞬時(shí)表達(dá).pdf

1、蘋果(Malus domestica)是落葉果樹中主要栽培的樹種之一，通過(guò)常規(guī)雜交育種對(duì)其改良十分困難。因此，采用基因轉(zhuǎn)移技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因植株已作為蘋果育種的重要手段。蘋果葉片是進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移較理想的受體材料。但由于蘋果葉片再生頻率及轉(zhuǎn)化效率較低，限制了蘋果轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用。 抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)在循環(huán)利用抗壞血酸、保護(hù)細(xì)胞組分抵御氧化損傷中發(fā)揮重要的作用。通過(guò)基因工程的方法提高植物中APX的活性，對(duì)增加植物活性氧清除

2、能力，因而對(duì)提高植物的抗氧化脅迫的能力具有重要意義。 本試驗(yàn)通過(guò)研究影響再生的因素，優(yōu)化了嘎拉和長(zhǎng)富2號(hào)葉片再生體系；通過(guò)抗壞血酸過(guò)氧化物酶基因瞬時(shí)表達(dá)的研究，采用葉盤法轉(zhuǎn)化受體材料，建立和優(yōu)化了嘎拉和長(zhǎng)富2號(hào)葉片遺傳轉(zhuǎn)化體系，為蘋果的轉(zhuǎn)基因研究奠定基礎(chǔ)。 主要研究結(jié)果如下： 1．獲得了高效的蘋果離體葉片再生體系通過(guò)調(diào)整植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類及濃度、不同部位葉片、葉片極性和暗培養(yǎng)時(shí)間等因素，確立了嘎拉和長(zhǎng)富2號(hào)葉片再

3、生體系，發(fā)現(xiàn)在分別含TDZ 0.5 mg·L<'-1>+NAA0.4 mg·L<'->和TDZ 4.0 mg·L<'-1>+NAA0.6 mg·L<'-1>的MS培養(yǎng)基上，以嘎拉葉片近軸面和長(zhǎng)富2號(hào)遠(yuǎn)軸面接觸培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)21d的暗培養(yǎng)，嘎拉和長(zhǎng)富2號(hào)葉片再生頻率分別達(dá)到100％和67％。 2．通過(guò)APX基因瞬時(shí)表達(dá)建立和優(yōu)化了蘋果的遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化了抗生素篩選濃度，通過(guò)APX基因瞬時(shí)表達(dá)，調(diào)整農(nóng)桿菌浸染過(guò)程中的多個(gè)因素如預(yù)培養(yǎng)時(shí)