蘋果Vf基因轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、Vf基因是源自Malusfloribunda821的顯性單基因，對(duì)蘋果黑星病表現(xiàn)抗性。本研究以本課題組培育的8個(gè)蘋果新品種為試材，對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Vf基因遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了研究?！　〔扇≡嚥闹l頂芽和側(cè)芽，應(yīng)用改良MS培養(yǎng)基，建立了試材無菌苗培養(yǎng)體系。在初代培養(yǎng)基中，添加抗壞血酸可有效抑制芽褐變。在繼代培養(yǎng)基中，添加BA1.00mgL-1和NAA0.05mgL-1，其無菌苗增殖倍數(shù)和生長率最高，最適于無菌苗增殖快繁。　　以蘋果新品種“

2、福祥”為試材，研究了基本培養(yǎng)基、激素種類及配比、外植體類型和處理方式、無菌苗繼代天數(shù)和碳源種類等對(duì)其外植體再生效果的影響。葉片再生不定芽的最佳條件：取自繼代后28天的無菌苗葉片，切傷后，正面向上接種于附加BA4.00mgL-1、NAA0.05mgL4、蔗糖30.0gL-1和瓊脂6.5gL-1的改良MS培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)21天后，轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)，21天獲得葉片再生不定芽。莖段再生的最佳條件：取自繼代后14天的無菌苗上不帶芽的莖段，接種于附加B

3、A4.0mgL-1、NAA0.2mgL-1、蔗糖30.0gL-1和瓊脂6.5gL-1的改良MS培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)21天后，轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)，25天獲得莖段再生不定芽?！　∫蕴O果新品種“福祥”為試材，應(yīng)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，建立了蘋果Vf基因遺傳轉(zhuǎn)化體系。取經(jīng)過液體預(yù)培養(yǎng)后的葉片和莖段外植體，并將葉片切傷，用適宜濃度的帶有Vf基因的EHA105農(nóng)桿菌液分別對(duì)這兩種外植體振蕩培養(yǎng)，然后將葉片和莖段外植體分別轉(zhuǎn)移到固體和液體培養(yǎng)基上進(jìn)行共培養(yǎng)，再將外植