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文檔簡介
1、農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法是小麥轉(zhuǎn)基因的主要方法之一。為了提高在小麥中農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的效率，我們研究了四種添加物（乙酰丁香酮(Acetosyringone),L-半胱氨酸(L-cysteine),毒莠定(Picloram)和CuSO4）對農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的影響。實(shí)驗(yàn)中使用的農(nóng)桿菌菌株是AGL1，內(nèi)含雙元質(zhì)粒pAL154/pAL156;選取的品種為四倍體硬粒小麥Stewart，使用的受體材料是小麥幼胚。小麥經(jīng)過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化后獲得了轉(zhuǎn)基因植株，我們使用PCR
2、法共檢測出轉(zhuǎn)基因植株213株，GUS染色檢測得到GUS表達(dá)的植株163株。Southern檢測結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因后代中外源基因單拷貝和多拷貝均有存在。對轉(zhuǎn)基因T1代進(jìn)行分離比檢測，結(jié)果表明，大約30％株系分離比為3:1，符合單拷貝或者單表達(dá)的分離比，其余株系也大多符合多拷貝分離比。
研究結(jié)果表明：
1）在侵染培養(yǎng)基和共培養(yǎng)培養(yǎng)基中加入乙酰丁香酮和L-半胱氨酸可以使農(nóng)桿菌侵染率提高，并且使愈傷組織的褐化率下降；
3、2）在共培養(yǎng)培養(yǎng)基和誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基中加入毒莠定可以使誘導(dǎo)愈傷率提高；
3）在誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基和再生培養(yǎng)基中加入CuSO4可以使再生率提高。最終影響到轉(zhuǎn)化率，使平均轉(zhuǎn)化率從2.8%提升到6.3%，而轉(zhuǎn)化率最高的株系轉(zhuǎn)化率可達(dá)12.3%。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到最佳的添加物濃度組合為：乙酰丁香酮為400μM，L-半胱氨酸為400 mg/L，毒莠定為10 mg/L，CuSO4為50 mM。本研究構(gòu)建了一個(gè)成熟高效的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系，可以為農(nóng)桿菌介
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