農桿菌介導的玉米轉化體系的優(yōu)化與抗蚜蟲基因的轉化研究.pdf

1、玉米是重要的糧食、飼料和工業(yè)原料作物,在我國國民經(jīng)濟中占有十分重要的地位。近年來,玉米蚜蟲危害呈現(xiàn)出日益嚴重的發(fā)展趨勢,局部地區(qū)已從次要蟲害上升為主要蟲害,給玉米產量造成了嚴重損失。本試驗以玉米幼胚培養(yǎng)再生體系為基礎,利用農桿菌介導法進行抗蚜蟲基因的遺傳轉化研究,旨在通過轉化體系的優(yōu)化將從薄荷中提取的抗蚜蟲基因轉入受體細胞并再生植株,創(chuàng)造抗蚜蟲玉米新種質,為抗蚜蟲玉米品種的選育奠定基礎。
　　 本試驗對玉米愈傷組織的誘導、再生、

2、抗生素的濃度、農桿菌侵染的條件等方面進行了較為細致的探討,獲得如下結果:
　　 在農桿菌介導的玉米遺傳轉化中,受體基因型是影響再生率的一個重要因素,不同基因型之間轉化效率存在較大差異。許多基因型較難誘導出高質量的愈傷組織,尤其是自交系植株再生困難。本試驗對4個自交系和8個雜交種的幼胚誘導特性進行了篩選,結果表明,87—1自交系和齊319×鄭22、昌7—2×HiⅡA等7個雜交種可以獲得良好的愈傷組織,是建立玉米轉化體系的理想材料,

3、尤以昌7—2×HiⅡA效果最好。這些基因型在分化前,對其愈傷組織進行不同濃度的2、4-D預處理,結果顯示用不含2、4-D的培養(yǎng)基進行預處理效果最好,植株再生率比對照有顯著提高,并且也明顯加快了再生進程。
　　 以抗生素為篩選標記的基因轉化,確定適宜的篩選壓力是其中的重要一環(huán)。本試驗研究了頭孢霉素(Cef)和G418、卡那霉素(Kan)、草丁瞵(PPT)對玉米胚性愈傷組織生長和分化的影響。結果表明:在農桿菌介導玉米遺傳轉化中,抑菌

4、劑Cef的濃度以100mg/L較為合適；Kan、G418和PPT的適宜濃度分別為6—10mg/L、15—25mg/L和9mg/L。
　　 本研究利用GUS基因的表達分別對影響轉化效率的一些條件進行了優(yōu)化,如侵染時間、乙酰丁香酮(AS)的添加、脫菌方式等進行了確定。結果表明,加入100μM AS后,GUS陽性率明顯增加；浸染時間10分鐘、脫菌處理后干燥4小時,農桿菌對愈傷組織的傷害較輕,得到的抗性愈傷組織最多；使用不同的浸染液對轉