柿果ACC合成酶反義基因的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、本研究以上西早生柿組培苗葉片為外植體，通過(guò)對(duì)離體葉片再生條件、抗生素篩選條件和根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)上西早生柿遺傳轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化，建立了高頻再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系，并將ACC合成酶基因?qū)肷衔髟缟两M培苗中。以期通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方法抑制ACC合成酶的表達(dá)，提高躍變型果實(shí)的耐貯性能。主要取得以下研究結(jié)果： 1.建立了高效穩(wěn)定的上西早生柿組培苗葉片再生體系通過(guò)對(duì)影響上西早生柿葉片再生的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、激素濃度配比、暗培養(yǎng)時(shí)間和葉片部位的研究，得出含

2、氮量低的MS(1/2N)培養(yǎng)基適合上西早生柿的葉片再生，暗培養(yǎng)10天能提高上西早生柿葉片的再生頻率，葉片基部的再生能力比葉尖和葉中間部位強(qiáng)，4.0mg/L的ZT能誘導(dǎo)上西早生葉片高效再生。在此條件下，上西早生柿的葉片分化頻率達(dá)97.8﹪，平均每葉片產(chǎn)生5.6個(gè)不定芽。 2.研究了抗生素對(duì)不定芽再生和生長(zhǎng)的影響，確定了適宜選擇壓。通過(guò)上西早生柿組培苗對(duì)抗生素的敏感性試驗(yàn)，確定的選擇壓為：葉片分化培養(yǎng)過(guò)程中，用200mg/L頭孢霉素

3、作為脫菌培養(yǎng)的抑菌濃度，20mg/L壯觀(guān)霉素作為對(duì)抗性不定芽的篩選濃度；在抗性苗生長(zhǎng)過(guò)程中，用100me/L頭孢霉素和10mg/L壯觀(guān)霉素進(jìn)一步篩選轉(zhuǎn)化抗性苗。 3.建立了高效遺傳轉(zhuǎn)化體系，并將ACC合成酶基因?qū)肷衔髟缟林小Ｍㄟ^(guò)對(duì)葉片預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、浸染時(shí)間、浸染時(shí)菌液濃度、AS濃度，共培養(yǎng)時(shí)間等遺傳轉(zhuǎn)化影響因素的研究，建立的上西早生柿遺傳轉(zhuǎn)化體系為：葉片預(yù)培養(yǎng)3天，用OD600為0.3的菌液浸染10分鐘，共培養(yǎng)4天。獲得的上西