蒙古黃芪異黃酮合成酶基因遺傳轉(zhuǎn)化水稻的研究.pdf

1、異黃酮屬于類黃酮物質(zhì)，天然存在于豆科植物中，它是一種植物雌激素，與雌激素結(jié)構(gòu)相似，為含有芳香環(huán)的非類固醇化合物。在組織中能夠和雌激素受體結(jié)合，具有弱類雌激素作用。異黃酮有多種生理作用，對婦女保健、心臟保健、免疫功能、預(yù)防癌癥，骨質(zhì)健康等方面具有重要作用。近年來引起了科學(xué)界廣泛關(guān)注。
　　 水稻具有與蒙古黃芪相似的代謝途徑，含有共同的前體物質(zhì)——柚皮素。蒙古黃芪中的柚皮素在異黃酮合酶的催化下合成異黃酮，但是水稻中不含有AmIFS基

2、因。本研究中，我們通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將來自于蒙古黃芪的異黃酮合酶基因（AmIFS）導(dǎo)入水稻中，使其在水稻的胚乳中特異性高效表達(dá)，期望創(chuàng)制出稻米中含有異黃酮的功能稻新品種，從而達(dá)到改良稻米保健品質(zhì)的目的。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、AmIFS基因雙T-DNA植物表達(dá)載體的構(gòu)建：pCDMAR-AmIFS-Hyg植物表達(dá)載體的兩段獨(dú)立的T-DNA區(qū)分別含有潮霉素標(biāo)記基因和目的基因。其中AmIFS基因由水稻胚乳中特異性高效表達(dá)的pGt1

3、驅(qū)動，且在AmIFS基因表達(dá)框的兩側(cè)連有兩段正向重復(fù)的煙草Rb7 MARs序列，能夠使AmIFS基因高效、穩(wěn)定表達(dá)。
　　 2、轉(zhuǎn)AmIFS基因水稻植株的獲得：通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將重組pCDMAR-AmIFS-Hyg表達(dá)載體導(dǎo)入到水稻品種“TG-9” 誘導(dǎo)的胚性愈傷組織中。經(jīng)過潮霉素抗性篩選，將抗性愈傷分化成苗，共獲得256株轉(zhuǎn)基因植株，經(jīng)PCR檢測其中20株呈陽性，AmIFS的陽性率為7.8％。
　　 3、轉(zhuǎn)AmI