黃金梨果實ACC合成酶基因的克隆與表達分析.pdf

1、黃金梨(Pyruspyrifoliacv.Whangkeumbae),屬砂梨系統(tǒng),品質(zhì)優(yōu)良,為我國主栽品種之一。但是,其果實不耐貯藏,采摘后在常溫貯存或冷藏條件下易失水、腐爛、黑心,從而失去商品價值,并伴隨產(chǎn)生許多其他問題。因此若能在黃金梨果實成熟階段通過調(diào)控對果實成熟產(chǎn)生影響的因子,進而延緩果實衰老,對提高其耐貯性,延長貨架期具有一定意義。
　　 本試驗以黃金梨(Pyruspyrifoliacv.Whangkeumbae)不同

2、成熟期果實為試驗材料,克隆得到黃金梨果實ACC合成酶基因序列,并對其進行生物信息學(xué)分析;利用實時熒光定量PCR的方法,檢測了ACC合成酶基因在不同成熟期黃金梨果實中的相對表達量變化,從分子水平進一步對乙烯合成過程進行研究,為接下來的遺傳轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ),更好的對乙烯合成過程進行調(diào)控。從而達到延長黃金梨貯藏期,貨架期的目的。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、針對黃金梨果實富含水分,多酚多糖等次生代謝物質(zhì)的特點,比較TAKARAplantt

3、issue法、TIANGENRNAplantplusReagent法、改良3％CTAB法這三種方法在的優(yōu)缺點,依據(jù)具體情況進行適當(dāng)調(diào)整,最終確定以TIANGENRNAplantplusReagent法作為黃金梨果實總RNA的提取方法。該方法提取效果好,可有效去除多酚多糖等物質(zhì)的干擾且總RNA質(zhì)量較高。
　　 2、根據(jù)已發(fā)表的早生新水中獲得的ACC合成酶基因設(shè)計引物,對黃金梨果實中的ACC合成酶基因進行克隆,通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)