小麥TaCBL3基因的克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、CBL蛋白（calcineurin B-like protein）是近年來發(fā)現(xiàn)的植物和某些原生動物所特有的一類Ca2+感受器，CBL與其相互作用的蛋白激酶CIPK（CBL Interacting Protein Kinase）構(gòu)成Ca2+-CBL-CIPK信號系統(tǒng)，在非生物逆境如高鹽、干旱、低溫等的信號傳遞中發(fā)揮著很重要的作用。
　　 本研究克隆得到了小麥TaCBL3基因的cDNA全長序列，并構(gòu)建了TaCBL3基因的真核過表達載

2、體，通過基因槍轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入到小麥中，獲得了轉(zhuǎn)基因小麥。主要進行了以下幾個方面的工作：
　　 （1）首先在數(shù)據(jù)庫中搜索并拼接小麥TaCBL基因的ESTs序列，然后設(shè)計特異性RT-PCR引物，克隆到一條CBL基因。
　　 （2）通過對該基因序列的生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，該基因編碼的蛋白含有和該家族其它蛋白不同數(shù)目的EF-hand 結(jié)構(gòu)域，擬南芥和水稻中CBL蛋白都有4個EF-hand結(jié)構(gòu)域，而該蛋白只有3個EF-hand結(jié)構(gòu)域

3、。通過序列比對以及進化樹分析發(fā)現(xiàn)，這個基因和OsCBL3的同源性最高，因此將其命名為TaCBL3基因。
　　 （3）已有的研究表明，OsCBL3基因能應(yīng)答高鹽、干旱、低溫等多種非生物逆境信號。為了驗證TaCBL3基因在非生物逆境脅迫中的作用，以及培育出新的抗逆小麥品系，我們將TaCBL3基因插入到pAHC25載體中，構(gòu)建了小麥TaCBL3基因的過表達真核載體。利用基因槍轉(zhuǎn)化技術(shù)將小麥TaCBL3基因?qū)氲洁嶜?023盾片中，通過