甜菜蔗糖磷酸成酶(SPS)基因的克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、中文摘要i———ii—i—一；—————————————————————I———————————————I———————————IIiiiiii中文摘要甜菜是我國(guó)糖料作物之一，在我國(guó)北方地區(qū)種植，在育種過(guò)程中，主要的目的是培育出高產(chǎn)、高糖、高品質(zhì)的新品種甜菜。在甜菜的生產(chǎn)中病蟲(chóng)害較多，從而影響到甜菜的質(zhì)量和品質(zhì)。為了使植物生長(zhǎng)性狀得到改變，基因工程是最直接有效的手段。由于基因工程具有周期短，見(jiàn)效快等優(yōu)點(diǎn)，所以，基因工程在植物新品種選育中

2、是一條有效的途徑。由于建立甜菜植株再生體系比較困難，較低的遺傳轉(zhuǎn)化效率，具有較差的重復(fù)性。因此。甜菜植株再生體系及遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立，轉(zhuǎn)化并培育出優(yōu)質(zhì)、高立的甜菜新品種是許多研究者的目標(biāo)，具有很大意義。本研究是通過(guò)RTPCR擴(kuò)增技術(shù)，將甜菜的蔗糖磷酸合成酶(SeS)基因克隆出來(lái)，進(jìn)行重組質(zhì)粒的構(gòu)建，將目的基因利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入甜菜，轉(zhuǎn)化條件得到了優(yōu)化，建立了穩(wěn)定的甜菜葉柄遺傳轉(zhuǎn)化體系，獲得轉(zhuǎn)蔗糖磷酸合成酶基因的甜菜再生植株。主要研究結(jié)

3、果如下：】對(duì)SPS基因進(jìn)行擴(kuò)增利用RTPCR方法從甜菜嫩葉片總RNA中克隆出甜菜的SPS基因。進(jìn)行測(cè)定序列，該序列與甜菜SPS基因編碼區(qū)的核苷酸序列其同源性可達(dá)100％。2構(gòu)建植物表達(dá)載體利用pMDl8TVector克隆載體的介導(dǎo)，將SPS基因與質(zhì)粒pBll21連接，構(gòu)建了以CaMV35S為啟動(dòng)予和Tnos為終止子的植物雙元表達(dá)載體，該載體含有選擇標(biāo)記基因npttI。3農(nóng)桿菌介導(dǎo)法優(yōu)化了甜菜葉柄遺傳轉(zhuǎn)化體系結(jié)果顯示：將生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的

4、農(nóng)桿菌菌液重懸稀釋?zhuān)_定了濃度OD600值為06；葉柄外植體經(jīng)過(guò)48h的預(yù)培養(yǎng)，確定侵染時(shí)間為5min；確定了共培養(yǎng)培養(yǎng)基中乙酰丁香酮的濃度為1001amol／L；確定了22。C～25。C共培養(yǎng)4d；經(jīng)過(guò)頭孢霉素的抑菌，確定了200mg／L的Kan濃度的篩選。AbstractAbstractSugarBeetisoneofourcountrysugarcrops，mainlygrowinnorthChina，inthebreedingp

5、rocess，themainpurposeistOcultivatehighyield、highsugar、highqualityvarietiessugarbeetIntheproductionofsugarbeettherearemorediseasesandinsectpests，thusaffectingthequalityofthesugarbeetInordertOchangetheplantgrowthcharacter，

6、geneticengineeringisthemostefficientmeansBecausegeneticengineeringhastheadvantagesofcycleshort、quickresultsSogeneticengineeringisaneffectivewayinnewvarietiesofplantsDuetoestablishsugarbeetplantregenerationsystemmorediffi

7、cult，genetictransformationefficiencyislow，repeatabilityisbadtherefore，sugarbeetplantregenerationandgenetictransformationsystemisestablished，producedhighquality，highyieldofsugarbeetvaretiesisthegoalofmanyresearchers，witha

8、greatsignificanceThisresearchisthroughtheRTPCR，sugarbeetSPSgenehasbeencloned，constructedrestructuredplasmid，Using49robateriummediatedtransformationisgoingtopurposegenetoleadsugarbeet，convertingconditionsareoptimized，this

9、studyestablishedstabletransformationsystem，getofSPSgeneturnedsugarbeetofregenerativeplantsThemainresultsasfollows1SPSgeneamplificationUseofRTPCRfromsugarbeetleavespieceofRNAclonedbeetSPSgeneSequencedetermination，thegeneh