Lactobacillus pantheris TCP102胞外多糖的提取純化和功能特性研究.pdf

1、乳酸菌胞外多糖(Lactic acid bacteria exopolysaccharide，LAB EPS)是乳酸菌在生長(zhǎng)代謝過(guò)程中分泌到細(xì)胞壁外的莢膜多糖或黏液多糖，是乳酸菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物。大量研究證明，LAB EPS作為一種大分子類物質(zhì)，具有增強(qiáng)免疫細(xì)胞免疫效果、抑制癌細(xì)胞增殖、抗氧化、抗病毒等功能，具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　本課題以Lactobacillus pantheris TCP102為出發(fā)菌株，分離純化其分泌的胞外

2、多糖，對(duì)各組分胞外多糖增強(qiáng)巨噬細(xì)胞免疫效果及抑制癌細(xì)胞增殖功能進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，得到如下結(jié)果:
　　1.對(duì)Lactobacillus pantheris TCP102的產(chǎn)胞外多糖條件包括培養(yǎng)基進(jìn)行了選擇，對(duì)發(fā)酵時(shí)間、溫度、初始發(fā)酵pH值和接種量分別進(jìn)行了單因素優(yōu)化，確定了Lactobacillus pantheris TCP102的最優(yōu)產(chǎn)胞外多糖條件為:MRS液體培養(yǎng)基，接種量為4％，發(fā)酵液初始pH為7，發(fā)酵溫度為37℃，發(fā)酵時(shí)間

3、為30h。測(cè)得最終糖產(chǎn)量約為900mg/L。
　　2.將得到的TCP102粗胞外多糖經(jīng)過(guò)DEAE-Sepharose Fast Flow和SepharoseCL-6B兩種色譜柱進(jìn)行分離純化，得到了三種胞外多糖純品，將它們分別命名為EPS1、EPS2、EPS3，其中EPS1為中性多糖，EPS2和EPS3為酸性多糖。紫外掃描表明它們均不含核酸和蛋白質(zhì)。從紅外光譜分析可得出，Lactobacilluspantheris TCP102分泌

4、的三種胞外多糖EPS1、EPS2和EPS3均具有多糖的特征吸收峰，存在α型吡喃糖環(huán)構(gòu)型。GPC檢測(cè)這三種EPS的重均分子量依次是20292Da、22971Da和19301Da。EPS1主要由半乳糖、葡萄糖和甘露糖組成，三者摩爾比葡萄糖∶甘露糖∶半乳糖為2.86∶1.48∶1。EPS2主要由半乳糖、葡萄糖和甘露糖組成，三者摩爾比葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖為1.26∶1∶1。EPS3主要由半乳糖、葡萄糖和甘露糖組成，三者摩爾比半乳糖∶葡萄糖∶甘

5、露糖為1.80∶1.58∶1。
　　3.將EPS1、EPS2和EPS3作用于巨噬細(xì)胞Ana-1后發(fā)現(xiàn)，這三種胞外多糖均能刺激巨噬細(xì)胞Ana-1增殖、產(chǎn)生NO、分泌TNF-α和IL-6;用EPS1、EPS2和EPS3刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，這三種胞外多糖也能同時(shí)刺激腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO，分泌TNF-α和IL-6。結(jié)果表明，TCP102分泌的這三種胞外多糖對(duì)巨噬細(xì)胞具有激活作用。
　　4.將EPS1、EPS2、EPS3作用于