桔梗多糖的提取、分離純化和結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、桔梗(Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.)作為一種藥食兩用的中藥材,在我國種植面積廣闊。藥理研究顯示桔梗多糖具有很好的抗腫瘤和增強機體免疫活性的作用,因此桔梗多糖(PGP)有很好的研究價值。本文以桔梗為模型,對桔梗多糖的含量測定、提取工藝、分離純化、純度鑒定及結(jié)構(gòu)分析等方面進行了較系統(tǒng)的研究?，F(xiàn)將研究方法與結(jié)論分述如下:
　　 1、采用間接法測定桔梗多糖的含量。運用蒽酮-硫酸法測定桔?？偺?包

2、括多糖和還原性的單糖)的含量,分別采用3,5-二硝基水楊酸法(DNS)、間接碘量法、菲林滴定法測定還原糖的含量。總糖含量與還原糖含量之差即為多糖的含量。三種方法測得的桔梗多糖的含量分別為95.55％、96.01％、95.75％。結(jié)果顯示三種方法測得的值相近,但是綜合實驗成本、設(shè)備、操作及影響測定的因素等多方面考慮,選用蒽酮-硫酸法與DNS法相結(jié)合測定桔梗多糖的含量。
　　 2、采用傳統(tǒng)的水煮醇沉法提取桔梗多糖,分別考察了提取溫度

3、、提取時間、料液比、提取次數(shù)對桔梗多糖提取率的影響,在單因素實驗的基礎(chǔ)上采用了四因素三水平正交試驗來優(yōu)化桔梗多糖的提取工藝。正交試驗結(jié)果表明,桔梗多糖提取的最佳工藝條件為:提取溫度為80℃,提取時間為2h,提取次數(shù)為2次,料液比為1:25。通過3次平行驗證實驗得出在該方案下桔梗多糖的提取率為42.51％。
　　 3、采用Sevag法、三氯乙酸法、三氯乙酸-正丁醇法3種方法分別對桔梗多糖進行脫蛋白研究,以蛋白脫除率和多糖損失率為衡

4、量指標(biāo),結(jié)果顯示Sevag法除蛋白效果較好,其工藝條件為:多糖:氯仿:正丁醇=25:5:1,劇烈振搖20min。脫色方法采用H2O2氧化法,脫色條件為:多糖液:H2O2=4:1,以濃氨水或0.1％NaOH調(diào)pH值為8.8,37℃保溫12h。采用Sephadex G-25柱層析法脫鹽及小分子物質(zhì)。
　　 4、純化后的桔梗多糖采用DEAE-纖維素52進行分離主要得到三種組分:PGPN、PGPA1、PGPA3。三種組分經(jīng)過Sephad

5、ex G-100柱層析進一步分離后均得到單一對稱的洗脫峰。利用Sephadex G-100柱層析、旋光度測定法、紫外分光光度法對三種多糖進行純度鑒定得出三種多糖都為均一的多糖,且都不含蛋白質(zhì)和核酸。利用Sephadex G-200柱層析測得三種多糖的分子量分別為10233、4677、23442。
　　 5、采用薄層色譜法(TLC)對桔梗多糖的單糖組成進行了分析,TLC圖譜顯示PGPN的單糖組成中含有果糖,還含有葡萄糖和半乳糖中的