雙孢菇多糖提取和分離純化的研究.pdf

1、隨著社會經濟的迅速發(fā)展,人民生活水平的不斷提高,注重營養(yǎng)保健成為現(xiàn)代人生活中的一個重要課題。中國的保健飲食習慣已經有上千年歷史,尤其近幾年,保健食品逐漸成為消費中的一大亮點。真菌多糖作為功能產品中的重要部分,也發(fā)揮著日益重要的作用。本課題主要研究了雙孢菇多糖的提取、分離純化和鑒定,具體內容及實驗結果如下:
　　(1)本實驗以優(yōu)質雙孢菇為原料,測定其水分含量為87.93％。雙孢菇多糖的紫外掃描圖譜顯示,最大吸收峰值在489nm處。采

2、用1％的檸檬酸護色,預處理后得到雙孢菇勻漿液。
　　(2)利用超聲波輔助復合酶法提取多糖,對超聲波進行單因素實驗,確定其最佳工藝條件:提取時間控制在30min左右,最佳料液比為1:20,最適宜溫度為30℃,同時600W為最佳超聲波提取功率。通過單因素及L9(34)正交實驗,確定纖維素酶的最佳工藝條件為:加酶量1.2％,pH4.0,酶解溫度50℃,酶解時間100min;中性蛋白酶的最佳工藝為:加酶量1.0％,pH7.5,酶解溫度45

3、℃,酶解時間100min。
　　(3)實驗以單因素實驗為依據(jù),以脫色率和多糖損失率為指標進行正交實驗。對活性炭的脫色溫度、時間、添加量及pH值進行了研究,確定其最佳脫色條件為:添加量1.5％,最適宜的pH值為5.0,最佳溫度50℃,脫色時間60min。
　　(4)Sevag法利用有機溶劑能使蛋白質變性沉淀的原理對其進行分離,該法條件溫和,脫除效率高。將Sevag法脫蛋白后的糖液經紫外全波長掃描,圖譜顯示,在260nm和280

4、nm處都沒有顯示出吸收峰,說明Sevag法脫蛋白的脫除效果較好,除蛋白效率高。
　　(5)通過對不同乙醇體積的醇沉與多糖得率關系的研究,當乙醇體積分數(shù)為75％時,多糖得率較高,顏色較淺為淡黃褐色。因此多糖醇沉時,選取75％的乙醇體積分數(shù)并置于4℃下進行醇沉。
　　(6)雙孢菇多糖經DEAE-纖維素52離子交換層析,其對糖液中各組分的吸附力不同,得到兩個目的峰:PR-Ⅰ和PR-Ⅱ,以及雜質。兩種主峰物質均易溶于水。PR-Ⅰ主要

5、是在剛一開始洗脫,0.02mol/L,pH=6.8的磷酸鹽緩沖液的洗脫條件下出現(xiàn)的;PR-Ⅱ是在0.2mol/L NaCl-磷酸鹽緩沖液濃度下洗脫出的。
　　(7)凝膠過濾法在生物大分子的分離和純化技術中是不可或缺的一類介質。對離子交換得到的組分PR-Ⅰ和PR-Ⅱ進行G-100凝膠過濾層析,均得到了單一對稱的完整峰形,說明PR-Ⅰ和PR-Ⅱ為均一級分多糖,實驗中分離出了純度較高的雙孢菇多糖。
　　(8)雙孢菇的多糖組分PR-