CGA衍生多肽CHR抑制腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞高滲透性的鈣相關(guān)信號(hào)機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討嗜鉻粒蛋白 A（Chromogranin A，CGA）衍生多肽Chromofungin（CHR）抑制腫瘤壞死因子-α（TNF-α）誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞高滲透性的鈣相關(guān)信號(hào)機(jī)制。
　　方法：以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系EA.hy926細(xì)胞為研究對(duì)象，CHR、TNF-α為處理因素。1）利用過(guò)氧辣根氧化物（HRP）穿透 Transwell小室吸光度（A）值表示EA.hy926細(xì)胞滲透性變化；2）利用細(xì)胞免疫熒光法、激光共聚焦顯微鏡觀察肌動(dòng)

2、蛋白F-actin表達(dá)和分布；3）利用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)EA.hy926細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度（[Ca2+]i）的變化。
　　結(jié)果：1）CHR抑制TNF-α誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞滲透性增加。與對(duì)照組相比，TNF-α組明顯增加EA.hy926細(xì)胞滲透性（1.20±0.09 vs1.77±0.20，P<0.05）； CHR（10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L）抑制TNF-α誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞滲透性增加，其

3、中CHR（10 nmol/L和100 nmol/L）顯著降低 TNF-α誘導(dǎo)的 EA.hy926細(xì)胞高滲透性（1.77±0.20 vs1.32±0.13，P<0.05；1.77±0.20 vs1.24±0.18，P<0.05）， CHR（1000 nmol/L）能夠降低TNF-α誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞高滲透性，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（1.77±0.20 vs1.41±0.26，P>0.1）。2）CHR抑制TNF-α誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞滲透

4、性相關(guān)蛋白的表達(dá)變化和分布異常。與對(duì)照組相比，TNF-α引起F-actin排列紊亂，應(yīng)力纖維形成增多；CHR明顯改善TNF-α誘導(dǎo)的上述效應(yīng)。3）CHR抑制TNF-α誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞外鈣內(nèi)流。CHR（10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L）作用于 EA.hy926細(xì)胞時(shí)細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度無(wú)明顯變化。TNF-α誘導(dǎo)EA.hy926細(xì)胞外Ca2+快速內(nèi)流，各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度Ft40、Ft100與起始

5、熒光值 Ft30相比，具有顯著性差異（熒光強(qiáng)度分別為：41.50±0.55 vs56.19±0.84，P<0.01；41.50±0.55 vs53.46±0.93，P<0.01）， CHR（10 nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L）能夠抑制TNF-α引起的Ca2+快速內(nèi)流， CHR（100 nmol/L）抑制效果最顯著。
　　結(jié)論：CHR抑制TNF-α誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞滲透性增加，這一作用可能是通過(guò)