多發(fā)性硬化導(dǎo)致的膀胱功能障礙以及雌激素對(duì)其治療作用的研究.pdf

1、背景和目的：
　　多發(fā)性硬化導(dǎo)致的膀胱功能障礙是泌尿系統(tǒng)里面極為復(fù)雜的疾病。多發(fā)性硬化會(huì)給中樞神經(jīng)系統(tǒng)帶來(lái)多樣的病理變化，與此同時(shí)會(huì)出現(xiàn)各個(gè)系統(tǒng)臨床癥狀。對(duì)于泌尿系統(tǒng)，由于受損的泌尿系功能相關(guān)的神經(jīng)病變部位以及受損傷程度不同也會(huì)導(dǎo)致泌尿系統(tǒng)功能也將出現(xiàn)各種變化，其中膀胱功能障礙主要表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿潴留、尿失禁等。目前對(duì)于多發(fā)性硬化這個(gè)疾病本身的研究較多，而關(guān)于多發(fā)性硬化神經(jīng)源性膀胱研究則較少.治療方法上面也是主要以控制癥狀，改

2、善泌尿系統(tǒng)功能為主，比如間歇導(dǎo)尿、抗膽堿藥物、肉毒素、辣椒素、手術(shù)等等，治療效果并不理想，針對(duì)多發(fā)硬化的治療如免疫抑制劑、免疫球蛋白注射、血漿置換以及β-干擾素等效果也不能讓人們完全滿意，因此需要一種新的同時(shí)針對(duì)多發(fā)性硬化和神經(jīng)源性膀胱的治療方法。近期有研究表明男女性別的差異會(huì)造成自身免疫性疾病發(fā)病差別，女性患者多發(fā)性硬化的患者是男性的2倍，女性懷孕后期多發(fā)性硬化發(fā)病率降低到原來(lái)的20％，有研究表明雌性激素對(duì)多發(fā)性硬化有防止疾病進(jìn)一步惡

3、化，促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)的作用。另外還有報(bào)道證明雌激素受體在膀胱的分布，以及雌激素對(duì)女性膀胱結(jié)構(gòu)和功能的影響，提示了雌激素在治療多發(fā)性硬化神經(jīng)源性膀胱的潛在可能。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）的動(dòng)物模型觀察多發(fā)性硬化導(dǎo)致的膀胱功能障礙，并通過(guò)給予模型動(dòng)物適量的雌激素處理，觀察模型動(dòng)物變化情況，初步驗(yàn)證雌激素在多發(fā)性硬化中神經(jīng)源性膀胱的可能治療作用。

4、
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.建立EAE小鼠模型：8-13周的C57BL/6雌性小鼠，應(yīng)用200ug mog35-55，與等體積含CFA量為10mg/ml的完全弗氏佐劑混勻，完全乳化成乳劑，皮下兩點(diǎn)注射，于免疫當(dāng)天及免疫后48小時(shí)腹腔注射400ng百日咳毒素誘導(dǎo)EAE小鼠模型。自免疫當(dāng)天起，觀察并記錄大鼠體重變化、臨床表現(xiàn)及神經(jīng)功能評(píng)分。
　　2.分組以及給藥：選取雌性C57BL6小鼠30只，隨機(jī)分10只對(duì)照組單純給予完全

5、費(fèi)氏佐劑以及百日咳，10只為EAE模型組，10只為雌激素處理組，即在完成免疫處理后每日給予雌激素（50μmol/L）100μl皮下注射。
　　3.標(biāo)本采集：在試驗(yàn)23天時(shí)，將小鼠用10%水合氯醛麻醉后，取出膀胱組織，稱重，放入液氮中保存，然后取多聚甲醛進(jìn)行全身灌流，取出小鼠脊髓組織用于制作石蠟切片。
　　4.相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：Luxol fast blue（LFB）染色和蘇木素-伊紅（HE）染色觀察脊髓炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及脫髓鞘情況，

6、用Western-Blot檢測(cè)膀胱組織中雌激素受體蛋白表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.EAE模型組的小鼠：神經(jīng)功能臨床評(píng)分、體重、以及泌尿系統(tǒng)功能變化都具有典型的MS臨床表現(xiàn)，HE染色表現(xiàn)出較明顯相關(guān)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。LFB染色表現(xiàn)出了明顯的脊髓脫髓鞘現(xiàn)象。
　　2.在多發(fā)性硬化神經(jīng)源性膀胱小鼠膀胱組織中，相對(duì)于對(duì)照組小鼠膀胱中雌激素受體明顯降低，給予雌激素治療后，雌激素受體表達(dá)略微上調(diào)。
　　3.在給予EAE

7、小鼠雌激素治療后，小鼠發(fā)病率降低，癥狀嚴(yán)重程度較未特殊處理的EAE小鼠輕，平均神經(jīng)功能評(píng)分降低。
　　結(jié)論：
　　1.EAE神經(jīng)系統(tǒng)臨床癥狀的評(píng)分與多發(fā)硬化性神經(jīng)源膀胱的癥狀密切相關(guān)。
　　2.雌激素以及雌激素受體在多發(fā)硬化性神經(jīng)源膀胱疾病中發(fā)生可能起到重要用。
　　3.在對(duì)EAE模型小鼠進(jìn)行雌激素處理后，發(fā)病率以及癥狀嚴(yán)重程度相對(duì)于未經(jīng)雌激素處理的模型組明顯降低，表明雌激素對(duì)多發(fā)性硬化導(dǎo)致神經(jīng)源性膀胱有明顯的改