黃體酮對(duì)多發(fā)性硬化的治療作用及相關(guān)機(jī)制的初步研究.pdf

1、多發(fā)性硬化是一種典型的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病。其典型病程表現(xiàn)為緩解-復(fù)發(fā)，進(jìn)行性加重，其發(fā)病機(jī)理迄今尚不清楚。因而，目前還沒(méi)有有效的治療方法。病理學(xué)研究業(yè)已證實(shí)，神經(jīng)癥狀進(jìn)行性加重的根本原因在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生脫髓鞘病變后，神經(jīng)系統(tǒng)本身的自發(fā)性髓鞘再生不完全，以至于本來(lái)完整的軸突由于長(zhǎng)期裸露，從而發(fā)生繼發(fā)性損傷。因此，促進(jìn)多發(fā)性硬化患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘再生是治療多發(fā)性硬化的有效方法。黃體酮是目前臨床上應(yīng)用廣泛的孕激素藥物，價(jià)廉易得。近

2、年來(lái)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)黃體酮對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)少突膠質(zhì)細(xì)胞分化、髓鞘形成以及髓鞘再生均有明確的促進(jìn)作用。 MBP蛋白是髓鞘的重要組成部分，對(duì)維持髓鞘的膜狀板層結(jié)構(gòu)有重要作用。當(dāng)髓鞘結(jié)構(gòu)被破壞時(shí)，MBP從髓鞘上游離。檢測(cè)腦脊液、血液中MBP蛋白的含量，可以間接了解中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘的情況。而PDGF-αR是少突膠質(zhì)前體細(xì)胞發(fā)育過(guò)程早期表達(dá)的蛋白之一，是少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的重要標(biāo)記。隨著少突膠質(zhì)前體細(xì)胞逐漸分化成熟，PDGF-αR消失。另外，Olig

3、1作為堿性螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)的重要成員，在少突膠質(zhì)細(xì)胞系細(xì)胞表達(dá)。它是MBP、PLP1、MAG等髓鞘特異蛋白基因的上游基因，可以促進(jìn)髓鞘特異蛋白基因的表達(dá)，同時(shí)抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞特異蛋白基因GFAP的表達(dá)。Olig1因子在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過(guò)程中可能不發(fā)揮作用，而對(duì)髓鞘修復(fù)有重要作用。既往通過(guò)免疫組化的研究證實(shí)，在老年大鼠腦組織中，由于Olig1蛋白低水平表達(dá)，髓鞘再生不完全。新近研究發(fā)現(xiàn)，Olig1蛋白在髓鞘生成和髓鞘再生過(guò)程中發(fā)生細(xì)胞核與

4、細(xì)胞漿之間的移位。Olig1蛋白只有定位于細(xì)胞核時(shí)才能發(fā)揮調(diào)控作用。多發(fā)性硬化患者腦組織病理研究也證實(shí)，Oligl蛋白位于細(xì)胞漿的Oligl+細(xì)胞的分化停留在幼稚階段，不能分化成成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞，重新形成髓鞘，完成髓鞘再生的過(guò)程。Oligl蛋白在髓鞘再生過(guò)程中發(fā)生核一漿移位，可能是髓鞘再生是否完全的關(guān)鍵因素。 實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎是研究多發(fā)性硬化的成熟的動(dòng)物模型。因此，本研究采用黃體酮治療實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎，運(yùn)用神經(jīng)

5、功能評(píng)分、髓鞘染色、電鏡等多種方法觀察黃體酮的治療效果。同時(shí)運(yùn)用免疫組化、WesternBlot、實(shí)時(shí)RT-PCR等技術(shù)，就其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。研究結(jié)果如下： 1.黃體酮治療組和對(duì)照組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分沒(méi)有明顯區(qū)別。實(shí)驗(yàn)中采用的神經(jīng)功能評(píng)分方法是相似研究中常用的評(píng)分方法，但是比較粗糙，不能精確表現(xiàn)出大鼠的神經(jīng)功能狀況。因此，根據(jù)評(píng)分結(jié)果，還不能定論黃體酮可以減輕實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎大鼠的神經(jīng)癥狀。但是電鏡檢查見(jiàn)黃體酮治療

6、組的髓鞘密度高于對(duì)照組，LFB染色后黃體酮治療組的正常髓鞘的光密度值也高于對(duì)照組，而且Marchi’s染色后黃體酮治療組退變髓鞘的光密度值低于對(duì)照組，提示黃體酮可以明顯促進(jìn)EAE大鼠腦組織的髓鞘再生。 2.PDGF-αR在少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的發(fā)育早期表達(dá)。壯年大鼠腦組織中PDGF-αR+細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞的突起數(shù)量和突起的分支數(shù)量不同，可以分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。突起的數(shù)量越少，突起分支的數(shù)量越少，細(xì)胞越幼稚。在嗅球和海馬，幼稚的Ⅰ型細(xì)胞密度

7、最高，提示其可能是髓鞘再生時(shí)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的生發(fā)中心。在小腦和腦干未見(jiàn)明確的PDGF-αR+細(xì)胞。提示在髓鞘再生時(shí)，少突膠質(zhì)前體細(xì)胞需要移行更遠(yuǎn)的距離到達(dá)小腦和腦干，或者由于少突膠質(zhì)前體細(xì)胞已經(jīng)分化到比較成熟的階段，PDGF-αR消失，其增殖能力受限，以至于這些部位的髓鞘再生困難，因此對(duì)慢性損傷也更加敏感。 3.黃體酮 1)治療組腦組織中髓鞘碎片的光密度值低于對(duì)照組。 2)治療組MBP蛋白含量也低于對(duì)照組。

8、 3)治療組和對(duì)照組的PDGF-αR蛋白在病程早期沒(méi)有明顯變化，在病程中一過(guò)性降低，后又逐漸恢復(fù)至正常大鼠水平。治療組和對(duì)照組之間沒(méi)有明顯區(qū)別。 4)治療組和對(duì)照組大鼠腦組織中Olig1mRNA的表達(dá)在整個(gè)病程中較正常大鼠而言，均沒(méi)有明顯變化。 5)治療組大鼠腦組織中Olig1蛋白位于細(xì)胞核的Olig1+細(xì)胞的數(shù)量明顯高于對(duì)照組。 研究結(jié)果提示：黃體酮促進(jìn)腦組織髓鞘再生的作用機(jī)制可能主要在于： 1)減

9、少中樞神經(jīng)系統(tǒng)由于脫髓鞘病變產(chǎn)生的髓鞘碎片，減少髓鞘碎片對(duì)髓鞘再生的抑制作用； 2)穩(wěn)定髓鞘膜結(jié)構(gòu)； 3)促進(jìn)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分化，重新形成致密的髓鞘結(jié)構(gòu)； 4)黃體酮不能上調(diào)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎大鼠腦組織中Olig1mRNA的表達(dá)。 5)促進(jìn)Olig1蛋白從細(xì)胞漿向細(xì)胞核移位，發(fā)揮對(duì)髓鞘再生的調(diào)控作用。 因此，黃體酮有望成為治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病的有效藥物，影響Olig1蛋白核-漿移位