細(xì)胞移植治療多發(fā)性硬化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、多發(fā)性硬化(Miltip1esclerosis，MS)是一種獲得性、免疫介導(dǎo)的慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病，多為青壯年發(fā)病，常致神經(jīng)功能殘畸。最令人困惑的是作為治愈反應(yīng)的髓鞘再生卻是不充分的，隨著疾病的進(jìn)展，脫髓鞘的病損數(shù)目卻保持增長，并明顯導(dǎo)致臨床病情的惡化。因而在臨床上，它難于診斷、處理和治療。 目的：觀察移植外源性髓鞘形成細(xì)胞的療效，以及低氧、細(xì)胞因子等對移植細(xì)胞O2A細(xì)胞(Oligodendrocyte-type2-ast

2、rocytecell)體外增殖的影響，為臨床治療MS做一些必要的探索。 方法：1.初步探討低氧和/或細(xì)胞因子對O2A細(xì)胞體外增殖的作用：(1)體外培養(yǎng)O2A細(xì)胞，進(jìn)行純化和鑒定；(2)持續(xù)3％低氧：低氧培養(yǎng)O2A細(xì)胞1h、2h、3h、4h、8h、12h、24h、48h和72h后取出，恢復(fù)常氧培養(yǎng)至9d；間歇3％低氧：將培養(yǎng)2d的O2A細(xì)胞每天分別低氧處理1h、2h、3h、4h，連續(xù)1-4d，恢復(fù)常氧培養(yǎng)至9d。(3)利用細(xì)胞記數(shù)

3、法和MTT法檢測低氧和/或細(xì)胞因子(PDGF，bFGF，IL-6，IFN-β1，GDNF及它們的某些組合)對O2A細(xì)胞的增殖作用；(4)用RT-PCR的方法檢測了低氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)在低氧O2A細(xì)胞中的表達(dá)變化。2.動物分組：正常對照組、EAE組、EAE+細(xì)胞移植組、EAE+假手術(shù)組和成瘤組；C57BL/6J小鼠(雌性，4-6周)30只，隨機(jī)分成每組6只小鼠。對急性EAE模型給予O2A細(xì)胞移植治療，通過神經(jīng)功能評分及病理學(xué)(包括

4、HE和FITC、BrdU、Gal-C、O4、A2B5的免疫組化)觀察治療效果。 結(jié)果：1.重復(fù)間歇性低氧(尤其每次3h，重復(fù)3次)可促進(jìn)O2A細(xì)胞的增殖，而超過24h低氧抑制O2A細(xì)胞的增殖；2.細(xì)胞因子IFN-β1、IL-6、PDGF、bFGF、GDNF以及它們之間的某些組合，可促進(jìn)O2A細(xì)胞增殖，其中PDGF+bFGF組以及IL-6同它們的組合作用尤為明顯；3.O2A細(xì)胞移植治療可改善急性EAE模型小鼠的神經(jīng)功能評分；4.移

5、植后病理顯示：病損明顯恢復(fù)，BrdU+和GaI-C+細(xì)胞數(shù)增多，04+和A2B5+細(xì)胞數(shù)與對照組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.成瘤試驗(yàn)未見腦組織出現(xiàn)腫瘤組織及腫瘤細(xì)胞。 結(jié)論：1.首次發(fā)現(xiàn)重復(fù)間歇性低氧(尤其每次3h，重復(fù)3次)可促進(jìn)O2A細(xì)胞的增殖，而超過24h低氧抑制O2A細(xì)胞的增殖；2.IFN-β1、IL-6等眾細(xì)胞因子，尤其是部分因子的組合，可促進(jìn)O2A細(xì)胞的增殖；3.重復(fù)間歇性低氧和細(xì)胞因子相結(jié)合的方法，可為細(xì)胞移植治療提供足夠