熒光假單胞菌A2a5 PHB解聚酶基因敲除載體構(gòu)建及以RSP為基礎(chǔ)的厭氧菌進(jìn)化研究.pdf

1、生物大分子是指生物體內(nèi)由分子量較低的基本結(jié)構(gòu)單位首尾相連形成復(fù)雜空間結(jié)構(gòu)，并具有生物活性的多聚化合物。聚-β-羥丁酸(PHB)是一種自然界典型的生物大分子，是一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值、環(huán)保價(jià)值的工業(yè)原料。
　　從本實(shí)驗(yàn)室分離到一株高產(chǎn)PHB的熒光假單胞菌Pseudomonas fluorescensA2a5中成功克隆得到PHB解聚酶基因phaZ，該基因和Pseudomonas sp.PC17typeⅡPHA operon中的PHA d

2、epolymerase基因同源性為96％。根據(jù)此基因設(shè)計(jì)敲除用上下游同源臂，連接在經(jīng)過修改的pHsh-kana上，得到可以用于敲除P。fluorescens A2a5中PHB解聚酶基因phaZ的質(zhì)粒pHsh-kanalac(PHB-depH)。
　　目前研究微生物系統(tǒng)進(jìn)化主要采用的是16S rDNA構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，但是其在厭氧菌的進(jìn)化研究中往往不盡如人意。還原力調(diào)控蛋白(RSP)是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，目前已在許多嚴(yán)格厭氧細(xì)菌和兼性厭

3、氧菌中北發(fā)現(xiàn)。它作用于呼吸鏈，通過檢測(cè)NADH/NAD+的比例變化，調(diào)節(jié)NADH脫氫酶的活性。它具有很高的保守性，具有作為分子鐘以研究厭氧細(xì)菌進(jìn)化的潛力。
　　本課題中，選取了51株嚴(yán)格厭氧細(xì)菌，分別取得他們的16S rDNA和RSP蛋白序列，同時(shí)采用最大似然法(ML)和貝葉斯法(BI)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。分別對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，同一序列下，BI方法略好于ML方法。同一方法下，RSP序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)生樹較16S rDNA構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)生樹能夠更