運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心室肌蛋白質(zhì)組差異性表達(dá)的研究.pdf

1、本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)的理論與技術(shù)，建立安靜和遞增運(yùn)動(dòng)負(fù)荷訓(xùn)練后大鼠心室肌蛋白質(zhì)組的差異性表達(dá)圖譜，初步篩選出對(duì)運(yùn)動(dòng)應(yīng)激具有重要意義的心室肌目標(biāo)蛋白質(zhì)，從蛋白質(zhì)組學(xué)定量與定性研究的角度探討運(yùn)動(dòng)性心肌疲勞的發(fā)生規(guī)律。 以10只雄性SD大鼠為研究對(duì)象，隨機(jī)分為對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)組，運(yùn)動(dòng)組經(jīng)過(guò)7周大強(qiáng)度遞增運(yùn)動(dòng)負(fù)荷訓(xùn)練后(最后一次力竭)6小時(shí)和對(duì)照組同時(shí)麻醉處死，提取心室肌組織的全蛋白樣品。采用雙向凝膠電泳進(jìn)行蛋白樣品分離，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)G

2、-250染色后，采用PD-Quest軟件進(jìn)行圖像分析和數(shù)據(jù)采集。選擇運(yùn)動(dòng)后“缺失”和差異性表達(dá)量在5倍以上的目標(biāo)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)原位酶解和質(zhì)譜鑒定。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組樣品蛋白質(zhì)點(diǎn)的平均匹配率分別為79％±10.46％和77.1％±8.23％，平均相關(guān)系數(shù)為0.73，獲得了重復(fù)性較好雙向考染圖譜。對(duì)照組與運(yùn)動(dòng)組蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)目分別為352±17和338±17個(gè)。運(yùn)動(dòng)后表達(dá)差異的點(diǎn)共有99個(gè)，運(yùn)動(dòng)后消失的點(diǎn)有5個(gè)；上調(diào)和下調(diào)

3、5倍及5倍以上的各有12個(gè)；表達(dá)量上調(diào)2倍及以上的有52個(gè)，下調(diào)2倍及以上的有42個(gè)。9個(gè)目標(biāo)蛋白點(diǎn)共鑒定出7個(gè)蛋白質(zhì)：運(yùn)動(dòng)后“缺失”的蛋白質(zhì)有心肌特異性長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A脫氫酶、線粒體電子傳遞鏈復(fù)合體I最大的亞基、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75、原肌球蛋白1α鏈；運(yùn)動(dòng)后表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)有腈水解酶家族成員2；運(yùn)動(dòng)后表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)有心肌α-肌球蛋白重鏈和一個(gè)分子量為21KDa的未知蛋白。在長(zhǎng)時(shí)間大強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)應(yīng)激條件下，大鼠的心室肌中的蛋白質(zhì)組發(fā)生了顯著

4、的變化。運(yùn)動(dòng)后“缺失”和下調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)與心肌收縮的調(diào)控失衡和能量代謝的方式轉(zhuǎn)變，以及細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，表明遞增運(yùn)動(dòng)負(fù)荷訓(xùn)練后，心肌疲勞的發(fā)生與心肌收縮力的下降、能量供給困難和心肌細(xì)胞的損傷有關(guān)。 值得重視的是，采用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，成功地篩選出心肌特異性長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A脫氫酶和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75等6種在運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中尚未涉足的，具有運(yùn)動(dòng)應(yīng)激特點(diǎn)的，對(duì)研究運(yùn)動(dòng)心臟具有重要意義的目標(biāo)蛋白質(zhì)，為深入研究運(yùn)動(dòng)性心肌疲勞提供了新的思路，奠