子宮肌瘤差異蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、目的：利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法研究子宮肌瘤組織和正常子宮肌組織的蛋白表達(dá)圖譜的差異,旨在尋找與子宮肌瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的蛋白質(zhì). 方法：1.選取因子宮肌瘤切除子宮患者的子宮肌瘤組織和配對(duì)子宮肌組織10例;2.24 cm、pH3-8的IPG膠條進(jìn)行第一相等電聚焦,12﹪的SDS-PAGE進(jìn)行第二向電泳分離,電泳后的凝膠用銀染進(jìn)行染色;3.用PDQtiest軟件對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和圖像分析,建立子宮肌瘤組織和正常子宮平滑肌組織的

2、蛋白質(zhì)組差異表達(dá)圖譜;4.用自動(dòng)凝膠采樣系統(tǒng)對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行自動(dòng)的采集,并用特異性的胰酶消化蛋白質(zhì);5.酶解后的肽段采用L,CQ Deca XP型高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行質(zhì)譜分析;6.通過SEQtJEST搜索SWISS-PROT的人非冗余蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫,鑒定差異蛋白;7.用Western blot和半定量RT-PCR的方法檢測(cè)14-3-3gamma在子宮肌瘤組織及正常子宮平滑肌組織中的表達(dá)水平. 結(jié)果：1.建立子

3、宮肌瘤組織和正常子宮平滑肌組織的蛋白質(zhì)差異表達(dá)圖譜;2.發(fā)現(xiàn)在子宮肌瘤和子宮肌組織中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異點(diǎn)共有37個(gè),其中在子宮肌瘤組織中表達(dá)上調(diào)大于5倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)有10個(gè)(P<0.05),在子宮肌瘤組織中表達(dá)下調(diào)大于5倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)有27個(gè)(P<0.05);3.在37個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)中,11個(gè)蛋白點(diǎn)通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫的檢索得到了初步的鑒定;4.對(duì)14-3-3gamma.蛋白的分析發(fā)現(xiàn),在蛋白及mRNA水平上,子宮肌瘤組織中14-3-

4、3gamma的表達(dá)顯著低于相應(yīng)正常子宮平滑肌組織(P<0.001). 結(jié)論：1.運(yùn)用雙向凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜分析的方法可以高通量、高分辨率、高靈敏的分離、分析子宮肌瘤組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì);2.篩選到的37個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)可能與子宮平滑肌瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān);3.14-3-3gamma.蛋白在子宮肌瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能扮演著保護(hù)作用,但其具體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及抑瘤途徑仍待進(jìn)一步研究.早期生長(zhǎng)反應(yīng)基因是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,其至少調(diào)控著30